В наши дни процедура переливания крови в практике специалистов по мелкодомашним превратилась из экзотики во вполне себе реальную рутину. Состояний, при которых оно требуется, существует великое множество, одного разбора гемолитических анемий хватит на большую отдельную стену текста. Тем не менее вопрос об определении совместимости донорской и реципиентской кровушки по-прежнему вызывает у многих специалистов затруднения, тем более что область эта сложна и не до конца изучена даже в Европах и прочих "прогнивших Западах".
Для начала следует разобраться, что же это такое - группы крови и зачем они нужны. Википедия сообщает нам, что это описание индивидуальных антигенных характеристик эритроцитов, определяемое так-то и так-то. Очень понятно, да? :)
Смысл в том, что организм животных через сложную систему оценки состава поверхностных молекул может (и должен) отличать свои собственные клетки от чужих, кои должны немедленно из организма элиминироваться. Эритроциты разных животных, даже одного вида, к сожалению, также могут отличаться по этим характеристикам. К сожалению - это, конечно, для клиницистов, которым приходится попотеть, чтобы найти совместимых доноров умирающему человеку или животному. При этом белки, определяющие группу крови - это не какие-то специальные белки, которые только для того и нужны, чтобы пощекотать трансфузиологам нервы, а поверхностные мембранные белки, выполняющие свои, не связанные напрямую с иммунной защитой организма, функции.
Общеизвестно, что у человека 4 группы крови. Это тоже не совсем так. 4 группы - только по системе АВО, резус - это уже другая система, которая увеличивает количество возможных вариантов до восьми. Но АВО и резус - это только верхушка айсберга, ибо существуют еще Kell, Kidd, Duffy и другие, о чьем клиническом значении я распространяться не буду.
Вернемся к нашим собакам...
В этих ваших интернетиках часто можно встретить утверждение, что у собак 7 групп крови (и перечисление). Увы, все далеко не так просто и ясно, а скудность информации не делает вопрос проще.
На самом деле перечисление A-G - это перечисление СИСТЕМ групп крови, точнее только один вариант из ныне употребляемых, датируемый аж 1961 годом. С тех пор многие и многие ученые мужи собирались и пытались привести в порядок имеющиеся данные о группах крови у собак, в 1976 году пришли к номенклатуре DEA (dog erythrocyte antigen), которая в данный момент считается общепринятой в США. Согласно это номенклатуре, системы описываются как DEA 1.1, DEA 1.2, DEA 3, DEA 4, DEA 5, DEA 7 и DEA 8. Присовокуплю табличку (см. картинку) из Шалма, очень наглядно объясняющую ху из ху в этой запутанной истории.
И это еще далеко не все варианты, а только те, которые более-менее хорошо изучены.
Система DEA 1
Из них наиболее клинически актуальной является DEA 1. В этой системе 3 пары ген-белок и 4 возможных фенотипа - DEA 1.1, 1.2, 1.3 и 0. У одной собаки возможен только один фенотип. У собак, в отличие от системы АВО человека или АВ кошки, в норме нет антител к антигенам других групп, что означает, что в экстренной ситуации собаке, которую никогда не переливали ранее, можно переливать кровь без определения совместимости по DEA 1.1, и переливание будет иметь необходимый эффект. Однако при необходимости повторного переливания уже возникнут сложности.
Есть вещи, которые надо объяснить подробно и на пальцах, и, увы, система DEA 1.1 в этом списке к простейшим не относится.
При переливании DEA 1-отрицательному реципиенту (фенотип 0) крови DEA 1-положительного донора (фенотип любой кроме 0) организм реципиента через 7-10 суток выработает антитела к антигену DEA 1, которые радостно разрушат любые эритроциты, имеющие на себе этот антиген. В дальнейшем такому реципиенту будет требоваться переливание строго DEA 1-отрицательной крови, в противном случае донорские эритроциты вместо ожидаемых трех недель проживут в организме реципиента от нескольких минут до (в лучшем случае) нескольких часов, сводя целебный эффект гемотрансфузии до 0 и даже уводя его в глубокий минус. При этом DEA 1-положительному донору допустимо переливать кровь DEA 1-отрицательного, при условии что этот самый донор никогда в жизни не был реципиентом.
Пока все понятно? :)
Антиген DEA 1, как уже говорилось, может наличествовать в виде вариантов DEA 1.1, DEA 1.2, DEA 1.3. Генеалогический анализ дает основания предполагать, что DEA 1 имеет аутосомно-доминантный тип наследования, причем DEA 1.1 > DEA 1.2 > DEA 1.3 > 0. Антигрупповые антитела, выработанные невезучим DEA 1-отрицательным донором абзацем выше, дают перекрестную реакцию со всеми тремя вариантами, но различной степени выраженности.
При иммунизации DEA 1-отрицательной собаки кровью DEA 1.1, антитела, которые она выработает, будут мгновенно разрушать эритроциты с DEA 1.1, вызывая острую гемолитическую реакцию, которая, если ее проводить не на стекле, а непосредственно в пациенте, с высокой вероятностью приведет к тяжелым осложнениям. При этом эритроциты с DEA 1.2 и 1.3 эти антитела будут агглютинировать, но не разрушать (хотя с точки зрения полезности для реципиента это немногим лучше).
В России популяционные исследования по группам крови не проводились, но ожидаемо, что процент DEA 1.1, 1.2 и 1.3-положительных собак будет очень сильно варьировать как от региона к региону, так и от породы к породе. В Штатах около 45% собак имеют группу DEA 1.1, 20% DEA 1.2, а DEA 1.3 толком не исследовалась (статистика нагло потырена из того же Шалма). По данным вот этого сайта: https://ahdc.vet.cornell.edu/, большинство грейхаундов DEA 1.1-отрицательны (правда, неясно, что там с DEA 1.2 и 1.3), что добавляет еще один плюс в копилку их положительных качеств как доноров, а лабрадоры - чаще DEA 1.1-положительны.
Помимо острых трансфузионных реакций, в большинстве которых "повинны" антигены группы DEA 1, считается, что у собак также возможен неонатальный изоэритролиз (более, впрочем, характерный для кошек, лошадей и людей ввиду наличия у них групповых антител без предварительной имунизации). Однако как раз из-за отсутствия в норме этих антител случаи считаются скорее спорадическими.
Система DEA 3 (в старой номенклатуре B)
В ней все проще. Собаки могут быть либо DEA 3-положительными, либо отрицательными. При этом у 20% В-отрицательных собак имеются антитела к В, даже при отсутствии предшествовавшей иммунизации несовместимой кровью. В Штатах из популяции всех-всех собак всех-всех пород DEA 3-положительными оказались 6% собак, но в выборке из популяции только грейхаундов DEA 3 имели уже 23% собак. Что еще раз намекает нам на большой разброс статистики по породам.
Переливание DEA 3-положительной крови собаке с соответственными антигрупповыми антителами (своими или приобретенными) вызывает разрущение эритроцитов донора в срок до 5 дней и может стать причиной острых трансфузионных реакций.
Система DEA 4 (С)
Также имеет всего два фенотипа, + и -. Без предварительной иммунизации у DEA-4-отрицательных собак антител к DEA 4 нет. До 98% собак в Штатах DEA 4-положительны, но опять же у нас все может быть совсем не так. Повторное переливание DEA-4-отрицательному реципиенту не вызывает гемолитической реакции даже при наличии антител к DEA 4, однако описан гемолиз у реципиента, которому переливали несовместимую кровь несколько раз подряд.
Система DEA 5 (D)
Два фенотипа, + и -. У 10% DEA 5-отрицательных собак в норме имеются антитела к DEA 5. Переливание крови сенсибилизированному реципиенту вызывает гемолитическую реакцию и гибель донорских эритроцитов в течение 3х суток.
Система DEA 6 (F)
Два фенотипа, + и -. DEA 6-положительные собаки очень распространены (в Штатах до 100%). В норме антитела к этому антигену отсутствуют. Переливание крови сенсибилизированному реципиенту приводит к умеренно выраженной трансфузионной реакции и умеренному снижению продолжительности жизни донорских эритроцитов.
Система DEA 7 (Tr)
Имеет три фенотипа, Tr, O и отрицательный. Антиген Tr имеется у 40-45% собак. Антитела к Tr и О имеются у 25% DEA 7-отрицательных собак, но они не имеют выраженного гемолитического эффекта, а вот при предшествующей сенсибилизации нарабатываются другие, способные разложить донорскую кровь за срок до 3х суток.
Система DEA 8 изучена мало. Кроме вышеперечисленных, существуют еще системы, не включенные в DEA по причине недавности открытия, а также ряд систем, специфичных, к примеру, только для восточных пород собак (шиба-ину и прочие).
Что делать?
Существуют коммерческие диагностические наборы для определения наличия или отсутствия антигенов DEA 1.1, 1.2, 3, 4, 5, и 7. При этом лично я видела в продаже в России только набор для DEA 1.1.
Стоимость определения одного антигена высока - для мегакоровского набора это 1-1,5 тысячи за пробу (это жеж специально подготовленные антитела, нанотехнологии буквально), поэтому в реальной жизни протипировать реципиента и хотя бы одного донора по всем из доступных антигенов - роскошь мало кому доступная. При наличии определенного количества постоянных доноров, имхо, имело бы целесообразность их типировать хотя бы по DEA 1.1, а дальнейшую совместимость определять уже по необходимости биопробой или пробой на индивидуальную совместимость. Это хотя бы позволило отделить собак, несовместимых по группе DEA 1 как наиболее клинически значимой и с наиболее серьезными посттрансфузионными реакциями.
В жизни, особенно в некрупных городах, "готовых" доноров нет, и совместимость определяется "на стекле" между реципиентом и каждым из доноров. Метод прост, нагляден, а главное дешев, однако позволяет исключить только вероятность немедленной трансфузионной реакции, ибо взаимодействие эритроцитов удается отслеживать только в течение 5-10 минут, пока капля не высохнет. Спрогнозировать жизнь перелитой крови на 3-5 суток по такому методу, увы, невозможно, поэтому возможность неэффективности переливания или отдаленных трансфузионных реакций следует всегда иметь в виду.
Наследуется группа крови от родителей. Группы крови показывают генетические маркеры на поверхности эритроцитов (красные клетки крови). Чужие маркеры эритроцитов иммунная система способна распознать и выработать против них антитела. В итоге развивается гемолитическая реакция, то есть происходит разрушение эритроцитов крови. Это, как правило, приводит к неутешительным последствиям.
В обычной повседневной практике современной ветеринарной клиники привычным делом стала процедура переливания крови - гемотрансфузия. Операционные и послеродовые кровотечения, огнестрельные ранения, травмы, отравления, сложные желудочно-кишечные кровотечения, последствия тяжело перенесенного пироплазмоза и другие разные заболевания, которые сопровождаются малокровием (анемией) - это все обстоятельства, которые могут даже привести к летальному исходу, если не сделать переливание крови. Так и было до недавних пор. Став обычной, привычной процедурой, переливание крови уберегло жизнь не одной сотне животных. Каждый хозяин собаки обязан знать группу крови своего питомца, чтобы, если понадобится, гемотрансфузию выполнили квалифицированно, без проблем, связанных с переливанием несовместимой крови.
В большинстве случаев, первое в жизни переливание крови собака переносит достаточно легко, и анафилактическая реакция не происходит. При следующем переливании важно воспользоваться кровью донора, которая совпадает по существенным, самым критичным факторам. Если учесть, что на сегодняшний день переливание крови - это процедура распространенная, то часто в клинику попадают собаки, которым уже выполняли гемотрансфузию. Хозяевам обязательно нужно знать, что второе и следующие переливания крови уже будут опасны без определения группы крови вашего пса.
Группа крови у собаки - это что?
Давайте выясним, что такое групповой антиген. Это белок, присутствующий в крови определенного организма на поверхности каждого эритроцита, который воспринимается как «чужой», когда попадает в другой организм. При этом совершается иммунная отдача с производительностью антител. Явная опасность здоровью и даже жизни питомца появляется при повторном переливании «чужой» крови.
Группа крови у людей и собак - это не совсем одно и то же. У людей можно выделить 2 основных групповых антигена: А и В, и несколько дополнительных, которые редко встречаются. Более того, у людей есть еще и резус-фактор, который тоже имеет антигенные свойства, и который либо присутствует, либо отсутствует в крови человека. Получается, что у людей существует основных четыре группы крови: 0(I), А(II), В(III), АВ(IV), и любая может быть либо резус-положительной, либо резус-отрицательной.
У собак насчитывают более десятка групповых антигенов, но резус-фактора нет. Еще долго будут специалисты изучать возможности и биологические свойства антигенов, их фактическое число и роль в организме собаки.
Для общепризнанных групповых антигенов собак сегодня утверждено международное определение: DEA – Dog Erythrocyte Antigen. Так отмечают цифрами групповые факторы или индивидуальные антигены: DEA 1.1, DEA 1.2, DEA 3, 4, 5, 6, 7 и т. д.
Для благополучного переливания крови необходимо знать фактор DEA 1.1!
DEA 1.1 способен активизировать внушительные иммунные реакции, так как обладает мощными антигенными свойствами. Как показывает практика, в случае несовместимости, к тяжелым клиническим осложнениям другие групповые факторы не ведут.
Есть лаборатории, которые имеют возможность определять фактор DEA 1.1. Если он есть в крови, то собака DEA 1.1 - положительная, если его нет, то DEA 1.1 - отрицательная. В соответствии с европейской статистикой, приблизительно 45% собак DEA 1.1 - положительные, остальные - отрицательные.
Собаки, которые по DEA 1.1 положительные - это универсальные реципиенты, им можно переливать кровь любого другого пса, но при условии, что собака-донор абсолютно здорова, и в анамнезе не имеет гемотрансфузии. Животное DEA 1.1 + может являться донором только для такой же, DEA 1.1 положительной собаки.
Собаки, которые отрицательные по DEA 1.1 - это универсальные доноры. Это значит, что другим собакам можно переливать их кровь, но самим им можно переливать только такую же, DEA 1.1 отрицательную.
Но, идеальный вариант - это когда положительной собаке переливают кровь от DEA 1.1 положительной, а отрицательной по DEA 1.1 - от отрицательной.
Что произойдет, если собаке с отрицательным DEA 1.1 перелить кровь положительную? Изначально антител к фактору DEA 1.1 нет в крови такой собаки, поэтому на практике всегда первое переливание проходит благополучно. Но чувствительность у этой собаки к не ее веществу, а у нее в крови образовалась «армия» соответствующих антител, останется на всю жизнь. И, если повторное переливание крови проводится наугад, то есть не учитывается группа крови, оно может оказаться летальным для этой собаки. Более того, если такая собака - сука, то не стоит вязать собаку с кобелями DEA 1.1 положительными, так как некоторые из щенков будут DEA 1.1 положительными. При этом возможна гибель плода еще внутри утробы, так как антитела матери свободно просачиваются к плоду через плацентарный барьер. Вдобавок ко всему антитела содержатся в молозиве и новорожденные щенки будут страдать гемолитической анемией, и даже могут погибнуть.
Немногие знают, что переливание крови проводится не только людям. Эта важная процедура порой спасает жизнь и животным. Если вы со своим питомцем решили сдать кровь, или наоборот вашему питомцу необходимо переливание, у вас наверняка возникнет много вопросов. В этой статье мы постараемся на них ответить.
Опасна ли процедура?
Абсолютно точно можем ответить: нет! Донорство безопасно. Перед манипуляцией врач рассчитывает необходимый объем крови, взятие которого не повлияет на здоровье донора.
У некоторых животных эта процедура все же имеет небольшой риск, так как для взятия необходима и введение седативных препаратов (животное во время процедуры должно лежать спокойно). Однако, беспокоиться не стоит - препараты обладают краткосрочным действием, поэтому риск минимален!
Кошкам пород группы риска по заболеваниям сердечно-сосудистой системы стоит пройти (кардиологическое обследование).
Берется у донора. Если результаты в норме, проводится тест на совместимость крови донора и реципиента. Если кровь совместима - производится забор крови у донора для переливания. Объем забираемой крови у донора составляет около 10% от всего объема циркулирующей крови.
Забор крови производится из вены на грудной, тазовой конечности или из яремной вены. Место забора крови специально подготавливается: выбривается шерсть, и кожа обрабатывается антисептиком. Забор крови происходит в течение 1-2 часов. Продолжительность процедуры зависит от рассчитанного объема крови и переносимости данной процедуры донором. Кровь собирают в специальный контейнер через внутривенный катетер.
При необходимости животное седатируется (вводятся успокоительные препараты).
Есть ли группы крови у питомцев?
Да, у собак и кошек имеются группы крови. У кошек они называются: А, В и АВ. Группа крови определяется тестом.
А у собак в основном проверяют наличие или отсутствие антигена, важного для контроля осложнений при переливании крови.
Помимо этого, перед процедурой проводится тест на совместимость крови. Выполняется это для того, чтобы окончательно убедиться, что кровь питомцев совместима друг с другом.
Нужен ли особый уход в домашних условиях после процедуры?
Нет. Донора просто необходимо покормить и дать отдохнуть. Никаких ограничений физической нагрузки ему не требуется.
Как часто можно сдавать кровь кошкам и собакам?
Ответ на этот вопрос не может быть однозначным. Фиксированным является лишь минимальный интервал времени между взятием крови на донорство. Этот интервал - 3 месяца. В среднем не принесет вреда сдача крови 1-2 раза в год. Естественно, при хорошем самочувствии «хвостика».
Что необходимо для сдачи крови?
Прежде всего, конечно, желание и здоровый, подходящий под требования к донорам питомец. Также нужно:
- Предоставить документы, подтверждающие наличие ежегодной вакцинации, выполненной в государственной или частной клинике.
- Иметь с собой порцию корма, воду и миску.
- Взять поводок, ошейник и намордник (для собак).
Каков размер вознаграждения донора?
Стоимость услуг донора оговаривается индивидуально. Рекомендуемое вознаграждение 1500-2000 рублей, в зависимости от размеров животного.
Чем можно заменить донорскую кровь для животных?
К сожалению, в современной ветеринарной медицине, в отличие от медицины человека, еще не созданы синтетические заменители крови. Большинство препаратов для восполнения компонентов крови не пригодны для животных в силу особой специфичности и способны вызвать у них тяжелую аллергическую реакцию. Именно поэтому нам так важно, чтобы животных-доноров крови становилось все больше. Вот почему так ценно ваше решение принять участие в программе донорства и спасти чью-то жизнь.
При тяжелых травмах и ранениях на охоте или в боях между собаками, болезнях возникает необходимость в переливании крови для спасения животного. Для этих целей подбираются доноры и создаются специальные банки при ветеринарных клиниках. Есть ли у собак группа крови? Ведь если есть, то возникает необходимость в определении совместимости крови разных животных с помощью классификации ее видов, то есть выделения в группы. Информация о группе еще нужна при разведении породы, для установки отцовства. Об этом и поговорим далее.
Как у всех млекопитающих, в организме собаки есть сердечно-сосудистая система, заполненная кровью. Она содержит в себе два основных компонента: плазму, то есть жидкую составляющую, и различные клетки. Они находятся в соотношении 70% и 30%. В плазме растворены белки, гормоны, витамины, питательные вещества.
К клеткам относятся эритроциты, тромбоциты, лейкоциты. Кровяные тельца красного цвета – эритроциты, представляют наибольшую группу. В эритроцитах содержится железосодержащий красный пигмент – гемоглобин, поставщик кислорода к тканям. Именно гемоглобин окрашивает ее в красный цвет. Тромбоциты, во взаимодействии с белками, способствуют ее свертываемость при повреждениях тканей и сосудов, предупреждая потери. Клетки белого цвета – лейкоциты, стоят на страже иммунной системы.
Функции
Кровь является основой жизни организма. Она обеспечивает циркуляцию кислорода, ферментов, электролитов, питательных веществ между тканями. В ее функцию также входит удаление избытка воды, минеральных веществ, продуктов обмена через легкие, почки, кишечник.
Терморегуляторная и защитная функции крови собаки разносят тепло и защищают от инфекций и кровопотерь. Она является основным гомеостатиком, поддерживая кислотное равновесие и водно-электролитный баланс.
Сколько групп крови у собак
Группы у них отличаются от человеческих. Выделяют 11 основных групп, которые отличаются составом белков на поверхности эритроцитов и типу антигена. В системе обозначения используются цифры 1-11 и буквы латиницы A,Tr, B, C, D, F, J, K, L, M, N. Кровь у большей половины собак, независимо от породы, определяется как 1-я или А группа.
Группа крови у собак и кошек серьезно отличается. У кошек различают всего лишь 3 группы и они несовместимы.
В зависимости от типа известных эритроцитных антигенов у собак принято междуврачебное обозначение DEA – Dog Erythrocyte Antigen. И различают 6 групп DEA1.1, DEA1.2, DEA3, DEA4, DEA 5, DEA 7. Группы DEA1.1— и DEA4+ считаются универсальными для донорства. Однако не стоит забывать об индивидуальных особенностях организма. Тест на совместимость нужно провести обязательно.
Какая группа крови у собак наиболее универсальна
Важным является фактор DEA1.1, который заносится в паспорт собаки. Он может быть положительным и отрицательным. Половина животных имеют DEA1.1+. Им можно транспортировать кровь любой собаки, желательно с таким же фактором DEA1.1+. А вот те, у кого DEA1.1— считаются универсальными донорами.
Если при переливании (гемотрансфузии), использовать донора с DEA1.1+, а реципиента с DEA1.1—, то первый раз пройдет успешно, так как отсутствуют антитела к другой крови. А к следующему разу у реципиента уже появятся антитела. При повторном переливании возможны иммунные реакции с тяжелыми последствиями.
Совместимость крови проверяют смешиванием двух видов и наблюдают наличие антигенов. Либо применяют специальные тесты совместимости. В любом случае проверка на совместимость обязательна.
Резус фактор у собак, по примеру людей, отсутствует.
Примечательно, что собачья кровь не имеет различий, связанных с породой. От можно переливать, например, а от можно при условии их совместимости.
Если появилась такая необходимость, то определить группу крови собаке круглосуточно получится в дежурной ветеринарной клинике. Там обязательно найдется необходимый инвентарь и квалифицированный персонал, который вам поможет. После установления всех необходимых параметров, их обязательно нужно записать в паспорт вашего питомца.
Для применения в лабораторных условиях
ВАЖНОЕ ПРИМЕЧАНИЕ О ФОРМАТЕ ТЕСТОВОЙ ПЛАТЫ
Просьба внимательно прочесть и соблюдать последовательность этапов.
Вещества, лиофилизованные в лунках с положительным контролем и с пробой пациента, неодинаковы.
Результаты анализа получены только с использованием пробы крови пациента, как в лунке с положительным контролем, так и в лунке с пробой пациента.
Описание и назначение:
Хотя общеизвестен факт, что у собак нет изоантител к несовместимым группам крови, и поэтому они в целом хорошо переносят переливание крови при несовместимости групп, но рациональная ветеринарная практика призывает избегать переливания несовместимых групп крови, за исключением неотложных состояний. Период полувыведения переливаемых несовместимых клеток будет довольно непродолжителен, и поэтому возможно, что должный терапевтический результат не будет достигнут. Также необходимо учитывать потенциальные потребности пациента в будущем. Антитела, получаемые от переливания несовместимой крови, могут образоваться только спустя 5-7 дней, и будут обладать долговременной жизнеспособностью. Это исключает возможность использовать в последствии несовместимую кровь при критическом положении.
К тому же, специалисты по разведению животных должны обратить особое внимание на антитела, вырабатываемые у самок при сенсибилизации в результате переливания крови несовместимых групп. Так как антитела присутствуют в молозиве, то самки с антителами к определенной группе крови не должны скрещиваться с самцами с этой группой крови, если предполагается, что они будут выкармливать будущих щенят. У грудных щенят разовьется гемолиз, обусловленный наличием изоантител, и они могут быть восприимчивы к заболеванию или даже умереть в результате гемолитической анемии.
На поверхности эритроцитов собак идентифицированы восемь специфических антигенов. На этих антигенах основывается принятая во всем мире система групповых антигенов крови у собак, «DEA» (Dog Erythrocyte Antigen = Эритроцитарный Антиген Собак). В ней характеризуются восемь общих групп крови, антигены DEA 1.1, 1.2, 3, 4, 5, 6, 7 и 8.
DEA 1.1, 1.2 – наиболее значимые антигены в крови собаки. Оба они высокоаллергенны, но DEA 1.1 – основной литический фактор в гемотрансфузиологии собак. Хотя все группоспецифические антигены системы АВ0 могут стимулировать образование изоантител, DEA 1.1 обладает сильнейшим стимулирующим потенциалом. Поэтому большинство реакций в результате переливания несовместимых клеток происходит, когда DEA 1.1-положительная кровь дается DEA 1.1- отрицательному реципиенту. Клинические значимые реакции при DEA 1.2 могут возникнуть, но слабее, чем при DEA 1.1. DEA7 может быть фактором при трансфузионных реакциях, но так как это холодовый агглютинин и изоантитело природного происхождения, считается, что у него очень низкая клиническая значимость. Считается, что оставшиеся антигены вызывают клинически незначительные проблемы при переливании.
В идеале предполагается, что вся переливаемая кровь DEA 1.1 и 1.2-отрицательная. Некоторые породы, например, борзые, особенно подходят в качестве доноров в связи с тем, что антигены DEA 1.1, DEA 1.2 и DEA 7 встречаются редко. Тем не менее, пока повсеместно не принята концепция банка собачьей крови, при которой кровь можно было бы приобрести незамедлительно, нормой остается переливание от собак, которые представлены в регионе в нужное время.
По оценкам 40% всех собак - DEA 1.1-положительные. Поскольку у некоторых собак происходит аутоагглютинация, и поскольку от очень анемичной собаки могут получиться сомнительные результаты, то прежде чем получать какую-либо информацию, показано типирование. Определение у собаки DEA 1.1-положительность либо отрицательность при рождении намного упрощает принятие решения в будущем. DEA 1.1-положительная собака может получать как DEA 1.1-положительную, так и отрицательную кровь. DEA1.1-отрицательная собака не должна получать DEA1.1-положительную кровь. RapidVet-H (Canine 1.1) предназначен для использования при классификации собак на DEA 1.1-положительных и отрицательных.
Условия проведения процедуры:
- Для получения точных результатов очень важно соблюдать последовательность операций.
- Всегда использовать новую пипетку для нового образца и новую мешалку для новой лунки. Повторное использование любого средства приведет к перекрестной контаминации и неточным результатам.
- Отдельные компоненты системы имеют разную стабильность. Хранить компоненты в соответствии с указаниями на маркировке. Не использовать компоненты после истечения указанного срока годности. Использование материалов с истекшим сроком годности может стать причиной недостоверных результатов.
- Разбавитель поставляется в бутылке с резьбовой крышкой для того, чтобы свести к минимуму непреднамеренное бактериальную либо иную контаминацию. Не использовать разбавитель из других источников в лаборатории.
- Механическая целостность пробы пациента крайне важна для правильности результатов.
- Всегда забирать полный шприц или пробирку с содержанием ЭДТА. Меньшее количество крови приведет к высокой концентрации ЭДТА в анализируемом образце.
Известные мешающие вещества: нет
Утилизация: Все биологические материалы, пипетки и мешалки утилизировать безопасным способом в соответствии со стандартами
Принцип и интерпретация анализа:
Анализ RapidVet-H (Canine DEA1.1) основан на реакции агглютинации, которая происходит, когда эритроцит, содержащий антиген DEA 1.1 на мембране поверхности взаимодействует с мышиным моноклональным антителом, специфичность которого к DEA 1.1 доказана, которое лиофилизуется на тестовой плате. Моноклональное антитело повторно растворяется разбавителем до формы антисыворотки, и тщательно перемешивается с цельной кровью пациента. Все DEA 1.1-положительные эритроциты реагируют с антисывороткой, вызывая агглютинацию. Антисыворотка совершенно не реагирует со всеми DEA 1.1-отрицательными эритроцитами. Результаты определяются визуально.
Внимание: У некоторых собак проявляется аутоагглютинация разной степени в связи с сывороточными факторами, которые вызывают у пациента агглютинацию собственных эритроцитов. Если это проявляется у пациента в опытных условиях, то этого пациента невозможно будет определенно типировать без выделения сыворотки и последовательной промывки оставшихся эритроцитов перед проведением анализа. В RapidVet-H (Canine DEA 1.1) имеется лунка для скрининга таких пациентов.
Реагенты и материалы:
Платы для агглютинационной пробы. На каждой плате имеется 3 визуально определяемых лунки, обозначенных как "Солевой скрининг на аутоагглютинацию", "DEA 1.1 положительный контроль" и "Проба пациента". Платы упакованы в индивидуальную упаковку с этикеткой, в каждой содержится пакет с осушителем. Хранить при комнатной температуре или в холодильнике (2-7°C). 1 бутылка с разбавителем. Прозрачная пластиковая бутылка содержит 0.02 моль/л фосфатного буфера (ФСБ) с pH 7.4. Капельный наконечник дозирует 50 мкл. Хранить при комнатной температуре или в холодильнике (2-7°C).
Пипетки и мешалки. В каждом полиэтиленовом пакете содержатся пластиковые пипетки и мешалки.
Хранение и стабильность:
- Платы для агглютинационной пробы стабильны при комнатной температуре (20-25°C) в течение 19 месяцев с даты изготовления. На каждой тестовой плате пропечатана дата истечения срока годности. Хранение в холодильнике (2-7°C) существенно не увеличивает период стабильности, но не оказывает отрицательного влияния на анализ и защищает от неожиданных или даже неустановленных изменений комнатной температуры вне данного диапазона. Нет необходимости выдерживать тестовую плату при комнатной температуре перед использованием.
- Разбавитель стабилен 24 месяца с даты изготовления. На каждой бутылке нанесена дата истечения срока годности.
ПРИМЕЧАНИЕ: На каждой тест-системе RapidVet-H (Canine 1.1) напечатана дата истечения срока годности, которая представляет собой ближайшую дату истечения срока годности среди компонентов системы. Не смотря на то, что у некоторых компонентов индивидуальные даты истечения срока годности могут быть позднее, их применение с другими компонентами из других систем не рекомендуется.
Последовательность операций:
- ЗАБРАТЬ у пациента минимум 0.4 мкл. крови в шприц или в пробирку, покрытую любо содержащую ЭДТА в качестве антикоагулянта. Для анализа требуется всего 100 мкл. цельной крови.
- ДОСТАТЬ тестовую плату из пластиковой упаковки.
- НАПИСАТЬ на плате кличку/номер собаки и дату проведения анализа.
- ПОМЕСТИТЬ тестовую плату на плоскую поверхность.
- ДОЗИРОВАТЬ 1 каплю разбавителя (50 мкл.) из капельного дозатора в лунку, обозначенную "Солевой скрининг на аутоагглютинацию".
- ВЗЯТЬ небольшое количество пробы пациента в пипетку и поместить 1 каплю (50 мкл.) в лунку, обозначенную "Солевой скрининг на аутоагглютинацию". Эта лунка не содержит реагентов. С помощью мешалки, УВЕРЕННО НАЖИМАЯ ВНИЗ распределить и перемешать материалы по ВСЕЙ лунке в течение примерно 10 секунд. (См. Примечание 1 по правильному использованию пипетки). У небольшого процента больных собак и здоровых собак происходит аутоагглютинация. Если наблюдается аутоагглютинация, ПРЕКРАТИТЬ анализ и перед тем, как продолжить, провести стандартную процедуру промывки клеток.
- ДОЗИРОВАТЬ 1 каплю разбавителя (50 мкл.) из капельного дозатора в каждую из 2 оставшихся лунок. Разбавитель помогает при реконструкции лиофилизованного материала в контрольной лунке и в лунке пациента.
- ВЗЯТЬ небольшое количество пробы пациента в пипетку и поместить 1 каплю (50 мкл.) в лунку, обозначенную "Положительная проба", и 1 каплю – в лунку, обозначенную "Проба пациента". С помощью новой мешалки, УВЕРЕННО НАЖИМАЯ ВНИЗ, распределить и перемешать материалы по ВСЕЙ лунке в течение примерно 10 секунд.
- ПОТРЯСТИ плату поперечным движением в течение 2 минут, обеспечивая перемешивание и "переворачивание" материалов внутри каждой лунки.
- УСТАНОВИТЬ плату под углом 20-30 ° на 2 минуты, чтобы избыток крови сбежал вниз лунки. Этому поспособствует размещение пакета с осушителем в верхней части платы.
- СЧИТАТЬ результаты и отметить лунки, в которых произошла явная агглютинация.
ПРИМЕЧАНИЕ
1: Использование пипетки: Удерживать пластиковую часть между большим и указательным пальцами у плоского заделанного конца, плотно нажать и не ослаблять давление. Удерживать часть для образца вертикально, поместить открытым концом пластиковой части ниже поверхности образца. Ослабить давление пальцев и забрать пробу. Далее удерживать пипетку в перпендикулярном положении прямо над лункой, в которую доставляется проба. Слегка нажать и выпустить одну каплю в лунку (50 мкл.). Дизайн пипетки таков, что выделяется немного более 50 мкл. для компенсации того небольшого количества образца, которое остается на мешалке.
Каждую пипетку использовать один раз, затем утилизировать. Ни при каких обстоятельствах не использовать пипетку повторно, так как может возникнуть перекрестная контаминация, приводящая к неточности результатов анализа.
Результаты:
Если анализ проведен правильно, в лунке, обозначенной "DEA1.1 Положительный контроль", должна произойти визуально определяемая, явная агглютинация.
ПРИМЕЧАНИЕ:
Единственное назначение лунки "DEA 1.1 Положительный контроль" – контролировать правильность проведения анализа. Материал, лиофилизованный в лунке "DEA1.1 Положительный контроль" не тот же, что в лунке "Проба пациента".
Если проявляется явная агглютинация пробы пациента в лунке, обозначенной "Проба пациента", то пациент - DEA 1.1-положительный. Если визуально не обнаружено агглютинации в лунке, обозначенной "Проба пациента", то пациент - DEA 1.1-отрицательный. Любая мелкозернистость, гранулярность, появляющаяся спустя 2 минуты, не учитывается при определении результатов. Скорость агглютинации и размер сгустков клеток у DEA 1.1-положительных пациентов может быть разной. В отличие от людей, некоторые животные могут обладать более чем одной первичной группой крови. В таком случае эритроциты могут нести антигены по каждой такой группе. Такое животное будет нести меньше антигенов DEA 1.1, чем животное, у которого в качестве первичной группы крови только DEA 1.1.
Если пациент очень анемичен, то агглютинация образца может быть разъединенной, в форме небольших скоплений, каждое с головку большой булавки, а не в виде явной агглютинации.