Несмотря на то что живые вакцины широко используют в ветеринарной практике, в последние годы все большее значение приобретают инактивированные препараты в силу своей безопасности. Это необходимо учитывать при вакцинопрофилактике болезней, возбудители которых способны длительно персистировать в организме животных в скрытой форме, затрудняющей их диагностику .
В настоящее время для изготовления инактивированных вакцин против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ИРТ КРС) используют первичнотрипсинизированные культуры клеток (почки теленка, бычьего тестикула), вирулентный штамм вируса 4016 с относительно невысоким уровнем накопления в этих клеточных культурах (6,0--6,5 1дТЦД5о/мл). Все это обусловливает трудоемкость технологии изготовления клеточного и вирусного сырья и определенным образом влияет на эффективность вакцинного препарата.
Цель исследований - разработка новой инактивированной вакцины против ИРТ КРС на основе аттенуированного штамма и более перспективной технологии, основанной на применении продуктивной перевиваемой культуры клеток и роллерного способа выращивания вируса.
Материалы и методы. В работе использовали перевиваемую культуру клеток МДВК; вакцинный штамм ТК-А вируса ИРТ КРС (активность 7,25-8,0 1дТЦД5о/мл); вирулентный штамм 4016 этого вируса (активность 6,0-6,5 1дТЦД адъюванты: минеральное масло, гидроокись алюминия с сапонином и аэросил.
Культуру клеток и вирус выращивали во вращающихся 3-литровых сосудах на роллерных установках (производительность 50 л вируссодержащей суспензии за цикл) по разработанной во ВНИИВВиМ методике. Вирусное сырье инактивировали теотропином или сернокислой медью в конечной концентрации 0,1 % при 37±1 °С в течение 7 сут. Полноту инактивации вируса оценивали в трех последовательных пассажах культуры клеток МДВК с интервалом 5 сут.
Для изготовления вакцины к инактивированному антигенсодержащему материалу в качестве адъювантов добавляли минеральное масло, или ГОА с сапонином, или аэросил. Вакцину проверяли на стерильность, полноту инактивации, безвредность, антигенную и иммуногенную активность.
Для оценки безвредности каждую серию вакцины вводили взрослым кроликам внутримышечно по 3,0 мл и в течение 7 сут наблюдали за клиническим состоянием животных.
5о/мл); инактиватор теотропин Антигенную и иммуногенную активность контролировали на взрослых кроликах и б-8-месячных телятах. Для этого кроликов двукратно вакцинировали внутримышечно в дозах 0,5 и 1 мл, а телят - подкожно в дозах 1, 2 и 5 мл с интервалом 14 дней. Через 14 дней после повторной прививки в сыворотке крови животных определяли уровень вируснейтрализующих антител, а телят подвергали контрольному заражению вирулентным штаммом 4016 вируса ИРТ КРС.
Результаты исследований и обсуждение. Данные по сравнительной оценке уровня накопления вакцинного и эпизоотического штаммов вируса ИРТ КРС с использованием соответственно перевиваемых и первично трипсинизированных клеток, роллерного и стационарного способов выращивания, а также технологии изготовления инактивированной вакцины из указанных штаммов представлены в таблице 1.
Препараты из вакцинного штамма, выращенного в перевиваемой культуре клеток МДВК, по экономическим и технологическим показателям значительно превосходили аналог из эпизоотического штамма 4016. При этом теотропин в качестве инактиватора обеспечивал экологическую безопасность убитой вакцины из штамма ТК-А.
Оценка иммуногенности различных образцов инактивированной вакцины против ИРТ КРС показала преимущество препаратов из вакцинного штамма ТК-А, выращенного в перевиваемой культуре клеток МДВК, по сравнению с таковой из вирулентного штамма 4016 (табл. 2). Препараты из вакцинного штамма в дозе 2,04-2,0 мл обеспечивали защиту привитых животных в течение 12 мес, а из эпизоотического даже в большей дозе 10,04-10,0 мл - не бо Иммунный ответ у телят и кроликов изучали, прививая их инактивированной вакциной против ИРТ КРС из штамма ТК-А, выращенного в перевиваемой культуре клеток МДВК в разных дозах (табл. 3).
У телят и кроликов, привитых двукратно инактивированной вакциной против ИРТ КРС из аттенуированного штамма ТК-А, титр вируснейтрализующих антител в сыворотке крови был одинаковым (см. табл. 3).
Минеральное масло при введении его в дозе 5,0 мл вызывало у некоторых телят на месте инъекции образование припухлости диаметром до 10 см при удовлетворительном общем состоянии животных. В производственных условиях такие осложнения наблюдали у 25- 30 % привитого скота, переходящие в отдельных случаях в гнойно-некротические абсцессы. Данное обстоятельство побудило нас продолжить работу по снижению реактогенности (местной реакции) масляной вакцины и одновременно искать другие эффективные и безвредные адъюванты.
При применении масляной вакцины в более низких дозах (1,0 и 2,0 мл) местная реакция на введение препарата была слабой или умеренной, иммунный ответ у привитых животных не снижался.
В производственных условиях опытные образцы указанной вакцины, хранившейся 1 год при 2-8 °С, в дозах 1,0 и 2,0 мл вызывали у животных на месте введения препарата умеренную или слабую реакцию и обеспечивали формирование напряженного иммунитета продолжительностью 12 мес.
После иммунизации телят инактивированной вакциной против ИРТ КРС с ГОА и сапонином (срок хранения 1 год при 2--80С) в дозах 5,0 и 2,0 мл общее состояние их было удовлетворительным, отмечали слабую местную реакцию, напряженный иммунитет сохранялся 12 мес.
При заражении иммунизированных и контрольных животных вирулентным штаммом 4016 вируса ИРТ КРС первые были устойчивы к данному возбудителю, а у непривитых отмечали повышение температуры тела до 41,0°С, слюнотечение, конъюнктивит и другие признаки, характерные для ИРТ КРС.
Максимальное накопление вируснейтрализующих антител регистрировали при двукратной иммунизации животных инактивированной вакциной против ИРТ КРС с интервалом 14-28 дней (табл. 4). Результаты опытов также свидетельствуют о том, что кроликов можно использовать в качестве лабораторной модели для контроля иммуногенности (по сероконверсии) инактивированной вакцины против ИРТ КРС.
Заключение. Разработана перспективная технология изготовления инактивированной вакцины против ИРТ КРС, отличающаяся экономичностью, высокой иммуногенностью и безопасностью получаемого препарата. Эффективность ее основана на использовании вакцинного штамма ТК-А, продуктивной перевиваемой линии клеток МДВК и роллерного метода выращивания, что исключает стадию концентрирова-ния вирусного сырья и делает производство инактивирован-ной вакцины против ИРТ КРС экономичным.
Н. И. ЗАКУТСКИЙ, В. И. ЖЕСТЕРЕВ, И. Ф. ВИШНЯКОВ, Л. Д. КОНАКОВА, Л. И. АНИСИМОВА, А. А. ШЕВЧЕНКО ВНИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии
ИРТ поражает преимущественно молодняк в крупных хозяйствах и характеризуется в основном острым воспалением верхних дыхательных путей и наружных половых органов. ИРТ проявляется в субклинической, легко и тяжело протекающих формах. Заболеваемость может достигать 100%, а смертность - 10%, особенно в период комплектования стад . Заболевание может распространяться при искусственном осеменении инфицированной спермой . Иногда наблюдают поражение (обычно у телят) центральной нервной системы. Штаммы, выделенные от телят и обладающие нейропатогенными свойствами, вероятно, представляют собой антигенный вариант вируса. Заболевание может протекать в виде ринотрахеита или пустулёзного вульвовагинита. Две формы течения заболевания вызываются разными подтипами (1 и 2) одного вируса и, по- видимому, связаны с различиями их органного тропизма. Может быть, поэтому обе эти формы не встречаются одновременно в одном и том же хозяйстве . Подтипы 1 и 2 герпесвируса крупного рогатого скота типа 1, вызывающие соответственно поражения респираторного тракта (инфекционный ринотрахеит) и гениталий (инфекционный вульвовагинит), не различаются по биологическим и серологическим свойствам, но их можно различить методом рестрикционного анализа генома. Циркуляция среди овец и коз вируса, близкородственного ГВ крупного рогатого скота типа 1, свидетельствует о том, что овцы и козы, вероятно, могут быть естественными хозяевами этого вируса. Во время температурных пиков животные быстро худеют, у лактирующих - резко снижается удой, у стельных коров часто наблюдают аборты. Вторичные инфекции усугубляют течение болезни. После острого периода болезни вирус длительное время сохраняется в организме без каких-либо клинических признаков.
Вирус обычно персистирует в региональных ганглиях в виде ДНК-копий. Факторами, способствующими переходу латентной инфекции в острую, могут быть стрессы различной природы, отелы, а в некоторых случаях неправильно проведенная вакцинация животных живой вакциной. Транспортировка животных после вакцинации может приводить к реактивации вакцинального вируса, по-видимому, вследствие повышения концентрации кортикостероидов в крови. Серонегативность при ИРТ не обязательно свидетельствует об отсутствии виру- соносительства.
В состоянии латенции подавляется генетическая экспрессия вируса. Развитие латенции и реактивация возбудителя регулируются иммунными и неиммунными механизмами. Активизация инфекции под действием дексаметазона происходит путем подавления иммунного механизма и прямого воздействия на ла- тентноинфицированные клетки.
Препарат способен реактивировать как «дикий», так и вакцинный штаммы. Реактивированные штаммы не отличаются от исходных. Реактивацию вируса ИРТ в эксперименте наблюдали спустя более 600 дней после инфицирования крупного рогатого скота .
Переболевание сопровождается стойким и длительным иммунитетом, который может передаваться потомству с антителами молозива. Однако даже выраженный гуморальный иммунитет не предотвращает персистенции вируса. В случае реинфекции вновь происходит размножение и выделение вируса, хотя болезнь протекает без видимых клинических признаков. При возникновении повторного заболевания трудно бывает отличить реинфекцию от реактивации персистируюшего вируса. Всех животных, имеющих антитела к ГВ типа 1 крупного рогатого скота, следует считать носителями вируса, находящегося в состоянии латенции.
Слизистые оболочки респираторного и генитального трактов больных животных продуцируют IgA и интерферон . Антитела в сочетании с комплементом ограничивают, но не исключают распространение герпесвируса в организме. Взаимодействие антител с клетками иммунной системы является более эффективным механизмом ограничения инфекции. Наиболее важными эффекторными клетками в антителозависимой цитотоксичности являются полиморфноядерные нейтрофилы, которые при наличии комплемента проявляют активность в отсутствие специфических антител. В подавлении инфекции клеточный иммунитет при ИРТ более эффективный, чем гуморальный, и в основном связан с Т-лимфо- цитами и макрофагами, хотя и те и другие могут поражаться вирусом.
В качестве средств специфической профилактики ИРТ в различных странах применяют живые и инактивированные вакцины. Однако в большинстве стран применяют в основном живые вакцины из аттенуированных штаммов вируса . Созданы живые маркированные вакцины на основе рекомбинантной ДНК, из которой удалены ген тимидинкиназы и другие гликопротеиновые «маркерные» гены. Вакцинация против ИРТ не предотвращает инфицирования, но зато снижает частоту возникновения (проявления) и тяжесть заболевания. Полевой вирус в организме таких животных размножается менее активно, и продолжительность его выделения короче .
Традиционные живые вакцины при ИРТ отличаются большим разнообразием. Например, в США применяют несколько живых вакцин. Большинство из них - штаммы вируса, аттенуированные длительным пассированием в первичных культурах или постоянных линиях клеток. При вакцинации живыми вакцинами необходимо использовать такие вакцинные штаммы, которые неспособны к персистенции, ибо не исключается возможность возникновения рекомбинантных вариантов при взаимодействии аттенуированного и вирулентного штаммов вируса. Имеются вакцины, полученные другим способом. Бельгийская вакцина представляет собой ts-мутант, который при 30°С размножается лучше, чем при 37°С, даже после реизоляции. Иными словами, вакцинный штамм обладает «маркером», отличающим его от полевого вируса. Подобный термочувствитель
ный мутант получен в Японии. Он сохранял свойства аттенуированного штамма после пяти пассажей на крупном рогатом скоте .
В качестве живой вакцины предложен дефектный по тимидинкиназе (ТК-) мутант. Интраназальное и внутримышечное введение вакцины телятам не вызывало развития у них признаков болезни, но способствовало образованию нейтрализующих антител и устойчивости к последующему интраназальному заражению вирулентным штаммом вируса, снижало его репродукцию в слизистой носа. Вакцинный (ТК-) штамм способен персистировать в организме привитых телят не менее 3 мес. и передаваться телятам при контакте без перехода в ТК+ генотип.
Персистенция и экскреция аттенуированного штамма вируса обнаружена также при применении других живых вакцин. Особенно часто и длительно вакцинный штамм вируса выделяется с семенной жидкостью привитых быков. Введение живой вакцины во время эстрального периода может сопровождаться поражением яичников , а вакцинация в ранний период стельности - к прерыванию беременности .
Считается, что интраназальная вакцинация более эффективна, чем подкожная или внутримышечная. Повторное введение вакцины усиливает иммунитет. Имеется ряд сообщений об успешном применении комбинированных вакцин против 2-4 возбудителей. В состав таких вакцин, кроме аттенуированного штамма вируса ИРТ, чаще всего входят аттенуированные штаммы вирусов парагриппа-3 и вирусной диареи крупного рогатого скота. Имеются данные, свидетельствующие об активизации носительства и выделении вируса ИРТ (вакцинного и полевого штаммов) у телят после заражения вирусом парагриппа-3 .
При интраназальном введении вакцинный вирус быстро проникает в клетки верхних дыхательных путей и глоточного кольца. Размножаясь в указанных клетках, вирус может выделяться во внешнюю среду в течение двух недель. После парентерального введения вакцинный вирус из секретов выделяется не всегда и с трудом.
Преимущество интраназальной вакцинации состоит в том, что при этом усиливается синтез IgA и локальное образование интерферона. Считается, что сухая вакцина для парентерального или интраназального применения должна содержать соответственно 105 и 104 ТЦД50/мл. Наряду с живыми вакцинами применяют инактивированные, обладающие рядом преимуществ, хотя их изготовление связано с дополнительными затратами. Инактивированные вакцины так же, как и живые, применяют двукратно с 2-3-недельным интервалом. Они могут существовать в виде моно- и комбинированных препаратов. Эффективность инактивированных вакцин против ИРТ зависит от ряда факторов, и прежде всего от концентрации протективных адъювантов.
Различные способы инактивации вируса оказывали неодинаковое влияние на антигенные детерминанты - мишени вируснейтрализующих антител. По степени разрушения антигенных детерминант инактиваторы располагались следующим образом: ультрафиолетовое облучение, нагревание (56°С), (3-пропиолак- тон и формальдегид. Согласно этим данным последнему должно отдаваться
предпочтение при изготовлении инактивированной вакцины . С целью повышения иммуногенности вакцины вирусные антигены концентрировали поли- этиленгликолем.
Инактивированная формолвакцина с масляным адъювантом из вируса ИРТ с исходным титром 108 ТЦД50/мл после двукратного введения в дозе 2 мл с 4-недельным интервалом индуцировала у телят выраженный иммунитет независимо от предшествующего иммунного фона. У телят, перенесших спонтанную инфекцию с низким титром сывороточных и отсутствием секреторных антител, после вакцинации формировались гуморальные (1:128 - 1:256) и секреторные (1:2-1:8) антитела. Наблюдалась корреляция между уровнем сывороточных антител и устойчивостью телят к заражению. Иммуносупрессия дексаметазоном показала, что вакцинация серонегативных телят не предупреждала от инфицирования и последующей латенции вируса.
В неблагополучном по ИРТ хозяйстве применяли вакцину с масляным адъювантом и ГОА. Сероконверсия наблюдалась уже после первого введения вакцины. Титр колостральных антител в сыворотке крови 6-8-дневных телят от привитых матерей был высоким. В стадах, где клиническая картина ИРТ была стертой, в сыворотке крови телят от привитых матерей титр антител составил 1:76 (у контрольных животных 1:13). Колостральный иммунитет длился 4-5 мес. Вакцинация телят вызывала сероконверсию лишь тогда, когда уровень материнских антител у них был очень низким .
Инактивированные вакцины против ИРТ и против ИРТ и ПГ-3 оказались эффективными при испытании в производственных условиях. Вакцинальный иммунитет у телят развивался, несмотря на высокий уровень колостральных антител . Иммуногенность субъединичной и инактивированной вакцин с масляным адъювантом оказалась сходной. Титр гуморальных антител у крупного рогатого скота после однократного и двукратного применения субъединичной вакцины был выше, чем при вакцинации инактивированной вакциной. Секреторные антитела формировались лишь после двукратной вакцинации и были равнозначными у животных, привитых обоими препаратами. Через 14 дней после второй прививки телята были устойчивы к интраназальному заражению вирулентным штаммом вируса ИРТ. Интенсивность размножения и продолжительность экскреции вирулентного штамма у животных, вакцинированных обеими вакцинами, были сходными. Иммунизированные телята выделяли меньше вируса и менее продолжительное время, чем непривитые.
Считают, что двукратное введение инактивированной вакцины сообщает привитым животным иммунитет продолжительностью 2 года . Имеется хороший опыт сочетанного применения живой и инактивированной вакцины ИРТ и ФРГ. Живую вакцину вводили двукратно с интервалом в 6 недель сразу после установления диагноза. Спустя 7 мес. двукратно с тем же интервалом вводили инактивированную вакцину. В результате такой вакцинопрофилактики новые случаи заболевания не регистрировали. Спустя четыре года после прекращения вакцинации животные оказались серонегативными, за исключением неко
торых телят, имевших материнские антитела перед вакцинацией. Авторы оценивают предложенную схему применения живой и инактивированной вакцины как эффективную для оздоровления поголовья . Комбинированная инактивированная вакцина, включающая высокоактивные антигены вирусов ИРТ, вирусной диареи и парагриппа-3, оказалась эффективным средством профилактики массовых патологических состояний, в том числе связанных с транспортировкой скота.
Испытание иммуногенности маркированной делеционной (gE") вакцины против ГВ-1 КРС на телятах показало, что внутримышечная или назальная иммунизация полностью не защищают от латентного инфицирования вирулентным штаммом гомологичности вируса . Инактивированная маркированная вакцина против ИРТ из негативного по гликопротеину Е штамма позволяла дифференцировать вакцинированных и инфицированных животных. Иммуногенность вакцины зависела от концентрации вирусного антигена .
Поскольку вирус ИРТ может приживляться и длительно персистировать в организме вакцинированных животных, трудно однозначно ответить на вопрос о значении специфической профилактики в оздоровлении хозяйств от ИРТ, или точнее: можно ли путем систематического применения вакцин освободить хозяйство от носительства полевых штаммов вируса. Однако имеется сообщение о том, что полного оздоровления можно достичь в результате систематического (четырехлетнего) применения в хозяйстве инактивированной эмульгированной вакцины.
Таким образом, существующие средства вакцинопрофилактики защищают крупный рогатый скот от инфекционного ринотрахеита, но не от заражения полевым вирусом, установления его латенции и последующей реактивации, реэкскреции. Однако живые вакцины при интраназально-внутримышечном применении обусловливают хороший локальный иммунитет и защиту животных от клинического проявления инфекции. Инактивированные высокоантигенные вакцины после повторного введения также индуцируют локальный иммунитет и предотвращают распространение вируса. Перспективным является разработка высокоэффективных рекомбинантных субъединичных вакцин, основанных главным образом на иммуногенности одного из главных гликопротеинов оболочки вириона, особенно гликопротеина Д. Этот гликопротеин может быть экспрессирован в бакуловирусной системе или включен в геном векторного вируса и использован в качестве живой вакцины.
Многие европейские страны для искоренения болезни используют интегрированную программу, включающую иммунизацию маркированными вакцинами, выявление и убой всех животных, имеющих антитела на полевой вирус.
Владимир Максимович, Павел Красочко, Ярослав Яромчик, Вероника Красочко
24.02.2016 Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота — хорошо изученная и широко распространенная болезнь в странах с развитым животноводством, в том числе и в Беларуси. Практически любое животноводческое предприятие, где не занимаются специфической профилактикой, сталкивается с тем или иным проявлением болезни как у молодняка, так и у взрослых животных. Проведенные исследования на основании экспериментальных данных помогут ветеринарному врачу определить стратегию выбора подходящей схемы и вакцины против инфекционного ринотрахеита КРС в условиях конкретного хозяйства и в определенной эпизоотической обстановке.
В патологии крупного рогатого скота наибольшее распространение получили респираторная, генитальная и абортивная формы, которые наносят значительный экономический ущерб животноводству.
Следует отметить трудно диагностируемую форму инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ИРТ КРС) — латентную. Латентное течение можно определить как замаскированную персистенцию вируса в организме хозяина. Переболевшие животные могут пожизненно оставаться скрытыми вирусоносителями. Латентное носительство вируса находится под постоянным контролем со стороны макроорганизма. При понижении резистентности организма происходит реактивация вируса из латентного состояния и его выделение во внешнюю среду. Реактивацию латентного вируса могут вызвать: нарушения условий содержания и кормления, стрессы, транспортировка, отелы, перегруппировки, вакцинации, инфицирование вирусами парагриппа-3, вирусной диареи и другие факторы.
Внедрение в организм хозяина вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота запускает каскад реакций с участием всех звеньев иммунной защиты. Антитела имеют определенное значение в развитии иммунитета при вирусных болезнях, при которых уровень циркулирующих в крови антител является показателем защиты. Функция антител состоит в защите от вирусемии и развития тяжелой клинической болезни. Гуморальный иммунный ответ включает выработку специфических антител, способных нейтрализовать вирус и участвовать в антивирусной антителозависимой клеточной цитотоксичности, которая усиливается действием комплемента.
Материнские антитела выявляются в течение 123 первых дней жизни, а у слабых телят — до двух месяцев. Новорожденные телята защищены от заражения вирусом после получения молозива от иммунизированных матерей. Однако материнские антитела не полностью защищают теленка, если у него устанавливается латентная инфекция в ранний период жизни. При вторичном заражении или рецидиве антитела играют главную роль в воздействии на вирулентность вируса и его распространение в организме животного.
Когда вакцина не дает желаемого эффекта
Для успешной борьбы с инфекционным ринотрахеитом крупного рогатого скота применяют своевременную диагностику болезни и средства специфической профилактики и терапии. Наряду с классическими живыми и инактивированными получены вакцины последних поколений — рекомбинантные и маркерные. Практическому врачу бывает сложно разобраться в многообразии биопрепаратов и определить подходящую вакцину и схему вакцинаций для конкретного хозяйства в создавшейся эпизоотической обстановке.
При проведении диагностических исследований у крупного рогатого скота практически болезнь не диагностируется, т. к. все животные или переболели, или были вакцинированы. В этой связи на ряде ферм или комплексов у животных уровень антител бывает очень высокий: или свыше 1:128-1:256, или более низкий — 1:8-1:32. Это позволяет заключить, что использование вакцин против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота не всегда дает желаемый эффект.
Учитывая это, мы провели сравнительное исследование иммунного ответа у животных при различном состоянии поствакцинального и постинфекционного иммунитета в отношении вируса инфекционного ринотрахеита. Изучена антигенная активность разных вариантов вакцин против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.
Материалы и методы
Работа выполнялась в условиях Научно-исследовательского института прикладной ветеринарной медицины и биотехнологии Витебской государственной академии ветеринарной медицины, а также животноводческих хозяйств Витебского и Минского районов.
На первом этапе исследований для изучения поствакцинального гуморального иммунного ответа у КРС к вирусу инфекционного ринотрахеита проводили отбор крови и получали сыворотку у сухостойных и дойных коров в хозяйствах, использующих разные варианты вакцин против инфекционного ринотрахеита. Выбор вакцин и сроки вакцинаций проводили и устанавливали специалисты хозяйств по производственным схемам обработок и вакцинаций сухостойных коров, утвержденным главными врачами районов и сельскохозяйственных организаций. Также для определения постинфекционного иммунного статуса отбирали пробы крови у сухостойных и дойных коров в хозяйствах, не проводящих вакцинацию.
Для выявления специфических антител использовали реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). РНГА ставили путем разведения исследуемых сывороток крови в растворителе в 96-луночных полистироловых планшетах с U-образными лунками в объеме 0,025 мл в разведениях от 1:2 до 1:256.
На втором этапе исследований для изучения гуморального иммунного ответа крупного рогатого скота на введение разных вариантов вакцин против ИРТ КРС проводили вакцинацию стельных и дойных коров живыми и инактивированными вакцинами, отбирали пробы крови и получали сыворотку.
Опыты по изучению гуморального иммунного ответа на введение разных типов вакцин на втором этапе исследований проводили по представленной схеме.
- Группа № 1. Вирус-вакцина живая культуральная против ИРТ КРС. Доза - 2 см3, д
- Группа № 2. Вирус-вакцина трехвалентная живая культуральная против ИРТ КРС, ВД и ПГ3 — «Тривак». Доза - 3 см3, д вукратно с интервалом 21 день;
- Группа № 3. Вирус-вакцина поливалентная инактивированная культуральная против ИРТ КРС, ВД, рота- и коронавирусной инфекции — «Тетравак». Доза - 5 см3, д вукратно с интервалом 21 день;
- Группа № 4. Вакцина живая Bovishield Gold. Доза - 2 см3, д вукратно с интервалом 21 день;
- Группа № 5. Вакцина инактивированная эмульгированная против ИРТ КРС. Доза - 3 см3, д вукратно с интервалом 21 день;
- Контрольная группа. Физиологический раствор. Доза - 3 см3, двукратно с интервалом 21 день.
При постановке опыта всего было сформировано пять групп коров по 5-10 голов в каждой группе из клинически здоровых животных. Критерием отбора служил обязательный низкий фоновый уровень специфических антител, а также как минимум вторая лактация у коров. Все животные, за исключением коров контрольной группы, подвергались двукратной вакцинации разными вариантами вакцин с интервалом 21 день, при этом стельных коров не вакцинировали живыми вакцинами во избежание возможных абортов. Отбор крови проводили в первый день опыта, на 10-й, 21-й (день ревакцинации), на 35-й и 60-й день. Все примененные в опыте вакцины зарегистрированы в Республике Беларусь.
В ходе опыта была сформирована дополнительная группа животных, имеющих высокий титр специфических антител против ИРТ КРС. Коровам данной группы вводили вакцину инактивированную культуральную против ИРТ КРС, отбор проб проводили в сроки, описанные в вышеуказанном опыте.
Для определения уровня специфических антител в сыворотках крови использовали диагностический иммуноферментный анализ (ИФА) — набор IDEXX IBR X3. Постановку реакции проводили в соответствии с инструкцией по применению. На предыдущих этапах лабораторных исследований сывороток крови, а также предварительных исследований по выбору метода определения качества гуморального иммунного ответа было установлено, что антигенная емкость ИФА-панели недостаточна для достоверной оценки высокого содержания антител даже у непрямого варианта ИФА. Поэтому сыворотки от иммунизированных животных разводили 1:500 для более достоверной разницы между высокими значениями количества антител и использовали в реакции, за исключением сывороток от животных контрольной группы.
Результаты исследований
При оценке полученных результатов серологических исследований на первом этапе установлено, что в хозяйствах, применяющих как живые, так и инактивированные вакцины, титры специфических антител находились на уровне значения от 6,7 до 7,2 log2, в то время как у невакцинированных животных титр антител определяли в значении от 4,9 до 5,3 log2.
Результаты серологических исследований при проведении второго этапа исследований приведены на рис. 1 и 2.
Использованные в опыте для вакцинации коммерческие вакцины показали хорошую иммуногенную активность. Отмечается более высокая иммуногенность у инактивированных вакцин при двукратном их применении.
Установлена также более высокая активность живых вакцин при однократной вакцинации, т. к. применение живых вакцин для профилактики ИРТ КРС у животных создает высокий уровень титра антител к сроку следующей вакцинации.
В случае, когда фоновый уровень антител высокий, что связано с переболеванием животных и циркуляцией эпизоотического штамма вируса инфекционного ринотрахеита, эффективность проводимой вакцинации практически невозможно определить серологически. У животных из группы, сформированной из коров с высоким фоновым уровнем антител, после иммунизации инактивированной вакциной не произошло существенного прироста уровня антител, т. к. он и до вакцинации был достаточно высоким. Поэтому судить об эффективности вакцинации инактивированными вакцинами в таких условиях можно только по признакам снижения заболеваемости и сохранности молодняка. Ввиду циркуляции высокопатогенных штаммов вируса ИРТ КРС в хозяйствах, не вакцинирующих животных против этой болезни, логичным приемом при профилактике будет использование живых вакцин для вытеснения циркулирующих эпизоотических штаммов вируса вакцинным аттенуированным штаммом. После нормализации эпизоотической обстановки по ИРТ КРС следует переходить к использованию инактивированных вакцин как более безопасных.
Таким образом, в хозяйствах, не проводящих специфическую профилактику ринотрахеита и решивших ее проводить, первоначально следует определить серостатус своего поголовья. По результатам данного исследования нужно выбрать тип вакцины для применения. При низком фоновом уровне специфических антител следует использовать инактивированные вакцины, а при высоком — живые. При использовании живых вакцин следует контролировать показатели заболеваемости.
При сохранении заболеваемости животных с характерными клиническими признаками ИРТ КРС, показателей воспроизводства, оплодотворяемости коров и количества абортов на том же уровне или при ее повышении на фоне проводимой вакцинации следует отказаться от применения живой вакцины ввиду возможной произошедшей реверсии вируса. Также не стоит забывать, что без устранения нарушений в технологии содержания, выращивания и кормления скота профилактический эффект от вакцинации может быть значительно снижен.
Инструкция по применению инактивированной комбинированной вакцины Комбовак-А против
инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной,
рота-, коронавирусной болезней и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота
(организация-разработчик - ООО «Ветбиохим», г. Москва)
I. Общие сведения
Торговое наименование - вакцина Комбовак-А.
Международное непатентованное наименование - вакцина инактивированная комбинированная против инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота-, коронавирусной болезней и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота.
Лекарственная форма - эмульсия для инъекций.
Вакцина Комбовак-А изготовлена из культуральной жидкости, инфицированной вирусами: инфекционного ринотрахеита (шт. В-25/шт. Т), парагриипа-3 (шт. В-19/шт. ВС-05), вирусной диареи (шт. СТ-89/шт. Т-04), респираторно-синцитиальным (шт. 89/шт. ТИ), рота- (шт. К-88), корона- (шт. КВ-90) и аденовирусами (шт. «Альфа») крупного рогатого скота, инактивированной формалином с добавлением 50% масляного адъюванта.
По внешнему виду вакцина представляет собой эмульсию белого или бледно-розового цвета, при хранении которой допускается незначительное отслоение эмульсии.
Вакцина расфасована по 10 мл (5 доз) и 100 мл (50 доз) в стеклянные или полимерные флаконы соответствующей вместимости, укупоренные резиновыми пробками, укрепленными алюминиевыми колпачками.
Флаконы с вакциной вместимостью 10 мл упакованы в картонные (пластиковые) коробки. Коробки с вакциной и флаконы вместимостью 100 мл упакованы в ящики (или другую транспортную упаковку). В каждую коробку с вакциной вкладывают инструкцию по ее применению.
Срок годности вакцины 18 месяцев от даты выпуска при соблюдении условий хранения и транспортирования. По истечении срока годности вакцина к применению не пригодна.
Вакцину хранят и транспортируют в сухом темном месте при температуре от 2°С до 8°С. Следует хранить в местах, недоступных для детей.
Флаконы с вакциной, подвергшиеся замораживанию, без этикеток, с нарушенной укупоркой и целостностью, измененным цветом, содержащие посторонние примеси, а также вакцину, не использованную в день вскрытия флакона, выбраковывают и обезвреживают путем кипячения в течение 15 мин с последующей утилизацией.
Утилизация обеззараженного препарата не требует соблюдения специальных мер предосторожности.
II. Биологические свойства
Вакцина Комбовак-А вызывает формирование иммунного ответа у крупного рогатого скота к инфекциям, обусловленным вирусами инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальным вирусом, ротавирусом, коронавирусом и аденовирусами КРС через 14 суток после двукратного применения, продолжительностью 8 месяцев у взрослых животных и 6 месяцев у молодняка в возрасте до 1 года.
Иммунитет от коров, вакцинированных в последний период стельности, передается потомству с молозивом. Колостральный иммунитет у новорожденных телят наступает после своевременной выпойки молозива (не позднее 2 ч после рождения).
Вакцина безвредна, лечебными свойствами не обладает.
III. Порядок применения
Вакцина Комбовак-А предназначена для профилактики инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальной, рота-, корона- и аденовирусной инфекции крупного рогатого скота в неблагополучных и угрожаемых по данным болезням хозяйствам.
Запрещено прививать клинически больных и/или ослабленных животных.
Вакцину вводят внутримышечно
взрослым животным в дозе 3 мл, телятам до 1 года - в дозе 2 мл с соблюдением общепринятых правил асептики. Для инъекции используют только стерильные материалы и инструменты. Для каждого животного используют отдельную иглу или шприц.
Перед применением в холодное время года вакцину подогревают в водяной бане до температуры 36-38°С, перед и в процессе применения флаконы с вакциной взбалтывают до образования однородной эмульсии.
Схема вакцинации №1 . Коров и телок случного возраста вакцинируют двукратно: за 4 и 1 неделю до осеменения, а затем ревакцинируют перед отелом дважды: первый раз - за 50-60 суток до отела, второй раз - через 14-21 сутки (но не позднее 30 суток до отела).
Схема вакцинации №2 . Все поголовье животных старше года прививают каждые 6 месяцев двукратно с интервалом 14-21 сутки. Не рекомендуется вакцинировать животных за 30 суток до отела и в течение 3 недель после отела.
Независимо от применяемой схемы вакцинации взрослого поголовья, телят вакцинируют в возрасте 7-10 суток и старше дважды с интервалом 20-25 суток. Ревакцинацию проводят однократно в той же дозе в возрасте 6 месяцев.
Быков-производителей вакцинируют каждые 6 месяцев двукратно с интервалом 14-21 сутки.
Симптомов проявления болезней, обусловленных вирусами инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальным, рота-, корона- и аденовирусами, или других патологических признаков при передозировке вакцины Комбовак-А не выявлено.
Особенностей поствакцинальной реакции при первичной иммунизации и ревакцинации не установлено.
Следует избегать нарушений схемы вакцинации, поскольку это может привести к снижению эффективности иммунопрофилактики болезней, обусловленных вирусами инфекционного ринотрахеита, парагриппа-3, вирусной диареи, респираторно-синцитиальным, рота-, корона- и аденовирусами. В случае пропуска очередного введения вакцины необходимо провести иммунизацию как можно скорее.
При применении вакцины в соответствии с настоящей инструкцией побочных явлений не отмечается. На месте инъекции возможно появление безболезненной, ограниченной припухлости.
Вакцину Комбовак-А не применяют в одном шприце с другими биопрепаратами и лекарственными средствами.
Убой животных на мясо разрешается не ранее 3 недель после вакцинации.
Молоко от вакцинированных животных, мясо и продукты убоя реализуют без ограничения.
IV. Меры личной профилактики
При работе с вакциной следует соблюдать общие правила личной гигиены и техники безопасности, предусмотренные при работе с лекарственными средствами ветеринарного назначения.
Все лица, участвующие в проведении вакцинации должны быть одеты в спецодежду (резиновые сапоги, халат, брюки, головной убор, резиновые перчатки) и обеспечены индивидуальными средствами защиты; очками закрытого типа. В местах работы должна быть аптечка первой доврачебной помощи.
При попадании вакцины на кожу и/или слизистые оболочки их рекомендуется промыть большим количеством водопроводной воды. В случае разлива вакцины зараженный участок пола или почвы заливают 5% растворами хлорамина или едкого натрия. При случайном введении препарата человеку место введения необходимо обработать 70%-ным раствором этилового спирта, обратиться в медицинское учреждение и сообщить об этом врачу.
Организация производитель: ООО «Ветбиохим». Адрес производства: 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, д. 16.