Окраска бактерий по Граму имеет важное диагностическое значение. Бактерии, прочно удерживающие окраску по Граму, получили название грамположительных. Бактерии, не окрашивающиеся по Граму, называются грамотрицательными.
Для окраски бактерий по Граму необходимы следующие реактивы.
Смесь в бутылке ставится в термостат на 24 час (можно и больше). Затем краску фильтруют.
В 5 мл дистиллированной воды растворяют йодистый калий, потом добавляют йод (2 г) и доводят объем дистиллированной водой до 300 мл. Раствор Люголя необходимо защищать от света, поэтому его надо хранить в склянках бурого стекла и в прохладном месте. Под влиянием света и тепла образуется йодная кислота и раствор становится негодным для употребления. Проконтролировать раствор Люголя можно при помощи лакмусовой бумажки. Если обнаруживается кислая реакция, то такой раствор надо нейтрализовать двууглекислой содой.
Окраска по Граму производится следующим образом:
- на фиксированный огнем мазок наносят генциан или кристалл-виолет на 0,5–1 мин;
- сливают краску и, не промывая водой, на препарат наливают раствор Люголя на 1 мин до полного почернения мазка;
- сливают люголевский раствор и наливают 95°-ный спирт на 0,5–1 мин, причем препарат надо покачивать и сменять спирт до тех пор, пока он не станет бесцветным; промывают водой;
- дополнительно окрашивают фуксином Пфейфера, сафранином или везувином в течение 2–3 мин.
- сливают краску, промывают водой и высушивают мазок, ставя стекло набок.
Способ окраски по Граму требует точного соблюдения времени при обработке препарата различными жидкостями. Особенно это относится к спирту. При более продолжительном, чем нужно, сроке все бактерии обесцветятся, при недостаточном – препарат окажется перекрашенным. Надо также помнить, что время действия краски, протравы и спирта зависит от толщины мазка: толстый мазок надо дольше красить и дольше обесцвечивать. Неравномерный мазок будет и неравномерно краситься, что может дать повод к неправильному заключению. Все это свидетельствует о необходимости хорошо и уверенно владеть техникой приготовления мазков и их окрашивания. Во избежание ошибок, которые иногда происходят при окраске по Граму, в литературе предлагается внести некоторые видоизменения в методику. В числе их можна назвать методику, предложенную Саватеевым для медицинской практики. Сущность ее заключается в том, что после окраски препарата генциан-виолетом и обработки раствором Люголя применяется отмывка не чистым спиртом, а спиртом с добавлением йода, под действием которого бактерии приобретают постоянный необесцвечивающийся темно-лиловый цвет (спирт по Саватееву – 50 мл спирта + 5 мл 5%-ной йодной настойки).
В литературе описано несколько модификаций методов окраски по Граму, из которых мы приведем лишь некоторые.
1. Окраска мазков по Граму, видоизменнная А. Синевым (1930):
а) на зафиксированный мазок накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанную 1%-ным спиртовым раствором кристалл-виолета;
б) наносят на бумажку две-три капли воды и оставляют на 2 мин;
в) снимают бумажку и наливают раствор Люголя;
г) обесцвечивают спиртом или ацетоном;
д) докрашивают фуксином Пфейфера.
Мазки получаются четкие и без осадка.
Для приготовления бумажек нарезают длинные полосы фильтровальной бумаги шириной 3 см, окрашивают и развешивают на веревке для просушки. Когда бумага хорошо подсохнет, ее нарезают кусочками по величине предметных стекол, складывают в банки и сохраняют впрок.
2. Модификация метода Грама по Хакеру (1921). Необходимые следующие реактивы:
а) кристаллический фиолетовый Хакера (с щевелевокислым аммонием).
Раствор А – кристаллического фиолетового (90% содержания краски) 2 г, этилового спирта (95%-ного) 20 мл.
Раствор Б – аммония щавелевокислого 0,8 г, дистиллированной воды 80 мл.
Растворы А и Б смешивают;
б) раствор Люголя в модификации Грама (йода кристаллического 1 г, йодистого калия 2 г, воды дистиллированной 300 мл).
в) раствор сафранина для докрашивания: сафранина (2,5% в 95%-ном этиловом спирте) 10 мл, дистиллированной воды 100 мл.
Препараты окрашивают в течение 1 мин кристаллическим фиолетовым (со щавелевокислым аммонием), промывают водопроводной водой не более 2 сек, наливают раствор Люголя и оставляют на 1 мин, затем промывают водой и высушивают. Докрашивают в течение 10 сек раствором сафранина, затем промывают водопроводной водой, высушивают, и исследуют.
3. А. В. Коронный (1959) рекомендует ускоренный метод окраски по Граму – окрашивание генциан-виолетом, обработка 5%-ным раствором фенола и обработка раствором Люголя и докрашивание карболовым фуксином Циля сокращается до 5 сек на каждый процесс. Обесцвечивание спиртом – 15 сек.
4. Окраска по Граму в модификации Г.П. Калины (1961). На предметное стекло наносят небольшую каплю дистиллированной воды и вносят в нее минимальное количество бактериальных клеток. Суспензию смешивают с петлей полупроцентного спиртового раствора кристаллического фиолетового, распределяют равномерно по площади 1 см2, подсушивают и фиксируют однократным проведением через пламя. После этого препарат в течение 1 мин обрабатывают следующим реактивом; 5%-ного раствора фуксина 10 мл, 10%-ного раствора йода 10 мл, ацетона 10 мл и 0,5%-ного спиртового раствора йодистого калия 70 мл. Опускают препарат на одно мгновение в этиловый спирт и быстро высушивают фильтровальной бумагой.
5. Окраска по Граму в модификации К.М. Бартона (1962). Применение ацетона дает более чистые препараты. Дополнительная окраска фуксином менее эффективна. Наиболее контрастным дополнительным красителем является смесь Сандифорда – 0,05 г малахитового зеленого, 0,15 г пиронина и 100 мл дистиллированной воды.
1. На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин ее снять, а краситель слить.
2. Нанести раствор Люголя на 1-2 мин.
3. Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 с до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
4. Промыть водой.
5. Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин, промыть водой, высушить и микроскопировать.
Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный (рис. 2.2.1; на вклейке). В основе этого метода лежит избирательное обесцвечивание - удаление комплекса генцианового фиолетового с
Йодом под действием спирта. Результат окраски по методу Грама определяется особенностями строения и химического состава клеточной стенки бактерий и зависит от способности удерживать образовавшийся в процессе окраски комплекс ген-цианового фиолетового с йодом.
Фирмикутные бактерии окрашиваются грамположительно, поскольку имеют многослойный пептидогликан, связанный с тейхоевыми кислотами. Последние обусловливают прочную фиксацию красителя и резистентность к обесцвечиванию спиртом. Грациликутные бактерии окрашиваются грамотрица-тельно.
Окраска по методу Грама имеет важное дифференциально-диагностическое значение и широко используется в микробиологии. К грамположительным бактериям относятся стафилококки, стрептококки, коринебактерии дифтерии и др., к грам-отрицательным - гонококки, менингококки, кишечная палочка и др. Некоторые виды бактерий (клостридии, гарднереллы) могут окрашиваться по методу Грама вариабельно в зависимости от возраста культуры, особенностей культивирования и других факторов, воздействующих на структуру клеточной стенки.
Основная ошибка, допускаемая при окраске по методу Грама, заключается в "переобесцвечивании" мазка этиловым спиртом. Грамположительные бактерии при этом могут утрачивать первоначальную окраску генциановым фиолетовым и приобретать красный цвет (характерный для грамотрицатель-ных бактерий) в результате последующей докраски мазка фуксином. Грамотрицательные бактерии в свою очередь могут сохранять сине-фиолетовый цвет генцианового фиолетового. Для правильной окраски следует строго соблюдать технику обесцвечивания.
Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена
1. На фиксированный мазок нанести карболовый раствор фуксина через полоску фильтровальной бумаги и подогреть 3-5 мин до появления паров.
2. Снять бумагу, промыть мазок водой.
3. Нанести 5 % раствор серной кислоты или 3 % раствор смеси спирта с хлористоводородной кислотой на 1 -2 мин для обесцвечивания.
4. Промыть водой.
5. Докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 мин.
6. Промыть водой, высушить и микроскопировать.
В основе метода лежат протравливание (разрыхление) клеточной стенки бактерий для усиления поглощения красителя и избирательное обесцвечивание под действием кислоты. Кис-лотоустойчивость бактерий обусловлена особым строением их клеточной стенки с повышенным содержанием липидов: раз-
ветвленных жирных кислот (миколовых кислот), глико- и фос-фолипидов, восков. Клеточная стенка кислотоустойчивых бактерий имеет очень низкую проницаемость, поэтому они плохо воспринимают красители. Раствор карболовой кислоты разрыхляет клеточную стенку и тем самым повышает ее тинк-ториальные свойства, а высокая концентрация красителя и нагревание в процессе окраски усиливают реакцию взаимодействия красителя с бактериальными клетками, которые при этом окрашиваются в красный цвет. При обработке препарата серной кислотой некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются и в дальнейшем окрашиваются метиленовым синим в голубой цвет, а кислотоустойчивые бактерии остаются окрашенными фуксином в красный цвет (рис. 2.2.2; на вклейке).
Метод основан на способности микроорганизмов удерживать образующийся при окраске комплекс генцианового фиолетового и йода. Это связано с особенностями строения и химического состава грамположительных и грамотрицательных бактерий. У грамположительных бактерий на поверхности клеток есть магниевые соли рибонуклеиновой кислоты, которые прочно связывают комплекс генцианового фиолетового с йодом и препятствуют его вымыванию спиртом. Кроме того, грамположительные бактерии имеют более выраженный пептидогликановый слой, в котором после обработки спиртом сужаются поры, что также делает невозможным вымывание красителя. В результате грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет.
У грамотрицательных бактерий отсутствуют магниевые соли рибонуклеиновой кислоты, пептидогликановый слой значительно тоньше, а размеры пор шире. Поэтому при обработке спиртом краситель легко вымывается, бактерии обесцвечиваются и при использовании дополнительного красного красителя грамотрицательные бактерии окрашиваются в красный цвет.
Методика окраски по Граму
1. На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового на 1-2 минуты, затем краситель сливают.
2. Наносят раствор Люголя на 1 мин.
3. Обесцвечивают препарат этиловым спиртом в течение 30-60 секунд до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
4. Препарат промывают водой.
5. Мазок докрашивают водным раствором фуксина в течение 1-2 минут, промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой.
Этапы окраски по Граму представлены на стенде.
Конец работы -
Эта тема принадлежит разделу:
Изучение строения бактериальной клетки и структуры клеточной стенки
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ... о механизмах окраски структурных компонентов бактерий клеточной стенки... Работа Изучение строения бактериальной клетки и структуры клеточной стенки...
Если Вам нужно дополнительный материал на эту тему, или Вы не нашли то, что искали, рекомендуем воспользоваться поиском по нашей базе работ:
Что будем делать с полученным материалом:
Если этот материал оказался полезным ля Вас, Вы можете сохранить его на свою страничку в социальных сетях:
| Твитнуть |
Все темы данного раздела:
Морфология прокариот. Методы выявления: окраска, микроскопия
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
изучить морфологию прокариот; особенности ультраструктуры бактерий, функции отдельных структур; ознакомиться с методами приготовления и окрас
Работа № 1. Морфология прокариот
Цель:сравнить формы и размеры микроорганизмов на примере кишечной палочки, стафилококка и гриба кандиды (см. теоретическую справку).
Самостоятельна
Морфология прокариот
Бактерии - это одноклеточные прокариоты растительного происхождения, но лишенные хлорофилла. Видны в световой микроскоп, размеры их измеряются в микрометрах. Размножение происходит
Техника приготовления препаратов-мазков, их фиксация и окраска
Для количественного учета, изучения морфологии, выявления спор, капсул, органоидов, включений препарат-мазок необходимо зафиксировать и окрасить.
1 этап. О
Методы окраски
Простые методы (ориентировочные)
Сложные методы (дифференцирующие)
1. Применяют для изучения морфологии микроорганизмов.
2. Окрашивают одним кр
Окраска по Цилю-Нильсену
Применяют для дифференциации кислотоустойчивых и некислотоустойчивых микроорганизмов. Кислотоустойчивость бактерий обусловлена повышенным содержанием в клеточной стенке и цитоплазме липидов,
Окраска по Ожешко
Метод основан на принципе окраски кислотоустойчивых бактерий. Отличие заключается в предварительной обработке микроорганизмов 0,5 % раствором соляной кислотой, что облегчает окраску спор карболовым
Окраска по Романовского-Гимза
Методика окраски по Романовскому-Гимзе:
Краска Романовского-Гимза состоит из метиленового синего, эозина и азура.
1. На мазок наносят рабочий раствор красителя (2 ка
Самостоятельная работа во внеурочное время
1. Дайте определение:
а) морфологические свойства - __________________________________________________
____________________________________________________________________________
Практикум: Микроскопическое изучение живых (нативных) и окрашенных микробов.
Микроскопический метод в микробиологии. Методические основы.
Микроскопия в световом оптическом микроскопе.
Световой микроскоп состоит из механической и оптической части. Механическая часть микроскопа - это штатив, состоящий из основания и колонки, к которой прикреплены тубус и предметный столик. В колонке имеются две винтовые системы для установки тубуса. Оптическая часть микроскопа состоит из осветительного аппарата, объективов и окуляров. Осветительный аппарат расположен под предметным столиком. В большинстве микроскопов свет отражается от зеркала и, пройдя через линзы конденсора, фокусируется в плоскости препарата. В современных микроскопах освещение достигается с помощью вмонтированного в микроскоп источника света. Объективы представляют собой систему линз в металлической оправе. Передняя (фронтальная) линза - самая маленькая. От нее главным образом зависит увеличение микроскопа. Расположенные за ней линзы называются коррекционными, так как они предназначены для устранения недостатков оптического изображения. При микроскопии объектив погружают в каплю масла, поэтому объектив называют иммерсионным объективом (лат. immercio - погружение), а масло - иммерсионным маслом. Иммерсионный объектив требует особо осторожного обращения. Фронтальная линза имеет настолько короткое фокусное расстояние до исследуемого объекта, что опускать объектив нужно медленно, глядя сбоку, чтобы не раздавить препарат, что связано с порчей линзы. Окуляры имеют две линзы: верхняя называется глазной, а нижняя - собирательной. Окуляры обозначают по тому увеличению, которое они дают, например: х7, х10, х15 и т.д. Предел разрешения оптического микроскопа равен 0,2 мкм.
Окраска микроорганизмов - комплекс методов изучения структуры и морфологии микроорганизмов при микроскопии препаратов, приготовленных из чистых культур или исследуемого материала.
Фиксированные бактерии окрашиваются лучше живых, так как клеточная стенка и цитоплазматическая мембрана живой клетки ограничивают проникновение в нее красителя.
Приготовление окрашенного препарата включает ряд этапов:
1) приготовление мазка;
2) высушивание мазка;
3) фиксацию мазка;
4) окраску;
5) высушивание.
Мазок готовят на чистых предметных стеклах, на середину которых наносят небольшую каплю воды и в нее с помощью бактериологической петли помещают исследуемый материал. Материал распределяют на стекле равномерным тонким слоем, размер мазка -1-2 см 2 .
Препарат обычно высушивают при комнатной температуре на воздухе. Для ускорения высушивания допускается подогревание мазка в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки.
Высушенный мазок подвергается фиксации, при которой мазок прикрепляется к стеклу (фиксируется), а микробы становятся более восприимчивыми к окраске. Способов фиксации много. Наиболее простой и распространенный - фиксация жаром - нагревание на пламени горелки (препарат проводят несколько раз через наиболее горячую часть пламени горелки). В ряде случаев прибегают к фиксации жидкостями (этиловый или метиловый спирт, ацетон, смесь равных объемов спирта и эфира - по Никифорову).
После фиксации мазок окрашивают. Количество краски, наносимое на препарат, должно быть таким, чтобы покрыть всю поверхность мазка. По истечении срока окрашивания (2-5 мин.) краску сливают и препарат промывают водой.
Существуют простые, сложные и дифференциальные способы окрашивания микробов. При простой окраске обычно употребляют одну краску, чаще всего красную - фуксин, или синюю - метиленовый синий. Фуксин красит быстрее (1-2 мин.), метиленовый синий - медленнее (3-5 мин.). Фуксин приготовляют в виде концентрированного карболового раствора (фуксин Циля), очень стойкого и пригодного для окраски в течение многих месяцев. Метиленовый синий приготовляется заранее в насыщенном спиртовом растворе, который стоек и может долго храниться.
Основные виды красителей, которые применяются в микробиологической практике:
Сложные способы окраски, при которых применяются два или более красителя, являются ценными методами, используемыми в микробиологической диагностике инфекционных болезней.
Механизм и этапы окраски по Граму
1. На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового. Через 1 минуту экспозиции перейти к п.2.
2. Нанести раствор Люголя на 1-2 мин (йод).
3. Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 сек. до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
4. Возможно дополнительно промыть мазок водой.
5. Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин,
6. Промыть водой, высушить и микроскопировать.
Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.
Микроорганизмы в своем нативном состоянии не видны не только в оптические, но и в электронные микроскопы. Причиной подобного явления является их прозрачность – ткани микроорганизма имеют коэффициент преломления света подобный стеклу.
Для изучения прокариотов под микроскопом используются различные методы окрашивания, что дает возможность придать цвет бактериям или их частям. Кроме того, микробы обладают – важной особенностью, состоящей в неодинаковом взаимодействии различных тканей прокариота с красителем.
Окрашивание бактерий
Способов придать цвет микроорганизмам много.
В зависимости от предмета окрашивания используемые для этого методики подразделяют на:
- позитивные способы, окрашивающие ткани микроорганизмов;
- негативные методы – окрашивающие пространство вокруг бактерии, в результате чего она становится видна как силуэт на окрашенном фоне.
Методика придания цвета микробам основана на присутствии в клетках кислотоустойчивых прокариотов оксикислот, липидов и воска, что является причиной неудовлетворительного окрашивания разведенными красителями.
При окрашивании по Цилю-Нельсону фиксированный препарат обрабатывают карболовым фуксином Циля и подогревают над горелкой до появления паров, охлаждают и повторяют процесс 3 раза. По завершении препарат промывают водой, обесцвечивают раствором серной или соляной кислот и тщательно промывают. Далее препарат в течение 1 минуты обрабатывают раствором метиленового синего, промывают водой и высушивают.
В результате цвет кислотоустойчивых микроорганизмов – интенсивно красный, на фоне остальной микрофлоры, имеющей светло-синюю окраску.
При необходимости дифференцировать бактерии лепры от применяется метод Семеновича-Марциновского:
- бактерии лепры окрашиваются в голубой цвет;
- возбудители туберкулеза – бесцветные.
Метод Пешкова
Окраска по Пешкову проводится для выявления эндоспор грамположительных бактерий. Используют жидкость Карнуа, метиленовый синий, фуксин по Пфейферу (или нейтральный красный).
Результат окрашивания по Пешкову прекрасно микроскопируется:
- зрелые эндоспоры становятся голубыми;
- молодые эндоспоры – насыщенно-синие;
- цитоплазма приобретает красный цвет;
- хроматин – зерна приобретают фиолетовую окраску.
Окраска микроорганизмов по Романовскому-Гимзе
Метод окраски по Леффлеру позволяет получить зримую картину путем последовательного применения танина и красителя. Также наличие жгутиков может выявить окраска по Морозову:
- обрабатывают препарат кислотой, при этом жгутики и оболочки разрыхляются;
- протравливают танином;
- окрашивают азотнокислым серебром – жгутики и оболочка покрываются толстым слоем препарата и приобретают цвет в гамме от желтого до насыщенно-коричневого.
Кроме того, Леффлер разработал методику окраски дифтерийных бактерий метиленовым синим Леффлера (готовят из спиртового раствора метиленового синего, слабого раствора щелочи и дистиллированной воды). В результате обработки бактериальная палочка приобретает голубой цвет, а гранулы волютина дифтерийных бактерий окрашиваются в темно-синий.
Помимо жгутиков, методики окраски бактерий позволяют определить наличие капсул, для чего применяется методика Бурри-Гинса: последовательная обработка препарата разведенной тушью, спиртом, фуксином Пфейфера. После чего образец промывается водой и высушивается.
Капсулы выглядят как светлые ореолы, расположенные вокруг красных бактерий на темном фоне.
Естественная окраска колоний микроорганизмов
Существует целая группа микроорганизмов, называемая хромогенными бактериями, колонии которых как в природе, так и на искусственных средах окрашены ярко и разнообразно. Цветовая гамма представлена от нежно-лимонного до густого темно-синего и даже черного. Хромогенных бактерий множество – это и кокки, и палочки, и спириллы. Химический состав красителей тоже очень разнообразен.
Независимо от цвета колонии все хромогенные бактерии совершенно бесцветны, окраску обеспечивают капельки, кристаллики или зернышки, расположенные вне клеток и являющиеся отходами жизнедеятельности бактерий. Эти отходы могут растворяться и диффундировать в окружающую среду, что приводит к окрашиванию пространства колонии.
Понятие «хромогенные бактерии» появилось в 1872 году благодаря Ф. Кону. Было выявлено, что бактерии, обладающие способностью к хромогенезу, не являются естественной, а лишь сборной группой, которую объединяет только способность окрашивать среду.
Неоднократно были предприняты попытки классификации хромогенных бактерий, однако успешных предложено не было.
Сегодня применяется классификация, основанная на растворимости пигмента:
- пигмент водорастворим;
- пигмент не растворяется в воде, но растворяется в спирте;
- нерастворимый ни в воде, ни в спирте пигмент.
Данная классификация несовершенна, что объясняется недостатком информации как по природе пигмента, так и по самой функции хромогенеза.
Хромогенных бактерий известно уже очень много, а сортов красителей, которые они производят, намного меньше. Это объясняется тем, что различные хромогенные бактерии производят один и тот же пигмент.
Все бактериальные пигменты делят на 3 большие группы:
- липохромы;
- продигиозин;
- бактериофлуоресцин.
Липохромы
Колонии, выделяющие липохромы, окрашены в цвета от желтого до красного. К ним относятся почти все кокки и в меньшей степени палочки.
- агрегатная форма – кристаллики;
- нерастворим в воде;
- растворим в органических растворителях (спирт, бензин, эфир, сероуглерод и др.);
- омыляется горячей щелочью;
- с концентрированной серной кислотой дает синее окрашивание – липоциановая реакция Цопфа.
Продигиозин
Бактерии, выделяющие красный пигмент продигиозин, известны с давних времен как бактерии «чудесной крови».
О них упоминал Пифагор, запрещая своим ученикам есть вареные бобы, которые простояли ночь – на них могла появиться «кровь». В Средние века замечали появление «чудесной крови» на продуктах, когда сначала появляются небольшие кровавые капельки, которые очень быстро растут и прямо заливают продукты кровавым слоем.
Появление «чудесной крови» отмечалось на богатых крахмалом продуктах – хлебе, рисе, поленте, вареном картофеле, бывает на мясе или отварных яйцах, но достаточно редко. Может развиться на молоке, тогда слой сливок окрашивается в красный цвет, а само молоко быстро створаживается.
Бактерии «чудесной крови» не являются патогенными, однако некоторые продукты их жизнедеятельности – токсальбумины – обладают токсическими свойствами.
Физико-химические свойства пигмента:
- жидкость;
- малорастворим в воде;
- растворяется в органических растворителях (спирты, эфир, хлороформ, сероуглерод и другие);
- при взаимодействии со щелочами образуется оранжево-желтая краска;
- при воздействии кислот образуется карминовая и далее – фиолетовая краска;
- солнечный цвет разрушает пигмент в растворах.
Бактериофлуоресцин
Флуоресцирующий пигмент вырабатывают маленькие бактерии-палочки, подвижные за счет жгутика на одном конце, все они не образуют спор.
Большая часть бактерий является сапрофитами и имеет широкий ареал обитания. Колонии обнаруживают зелено-травяную флуоресценцию.
Физико-химические свойства пигмента:
- в чистом виде не выделен, предположительно является белковым веществом;
- водорастворим;
- не растворяется в спиртах, эфирах и бензине;
- концентрированный раствор имеет бледно-желтый цвет и флуоресцирует голубым цветом;
- обработка щелочью сдвигает флуоресценцию в зеленый цвет;
- при добавлении кислоты флуоресценция прекращается.
Кроме трех основных пигментов, были выделены пиоцианин (синий), пиоксантин (красно-бурый), синцианеин (синий) и другие.
Одни бактерии образуют пигмент всегда, другие микроорганизмы выделяют пигмент иногда. Есть бактерии, которые всегда выделяют только один пигмент, а есть бактерии, выделяющие несколько различных пигментов.
Хромобактерии изучены недостаточно хорошо, не выявлены причины, от которых зависит потеря хромобактериями способности выделять пигмент. Такие колонии называют лейкорасой. Однако при дальнейших посевах лейкораса может дать нормальное окрашивающее потомство.
Изучение способности бактерий к хромогенезу представляет большое не только научное, но и практическое значение.