В настоящее время врачи завершают работу над созданием искусственных маток, в которых эмбрионы смогут развиваться вне материнского тела. Эта работа рассматривается, как настоящий прорыв в борьбе с бездетностью, отмечается в сегодняшней статье влиятельной британской газеты Guardian.

Ученым удалось создать прототип женского лона, полученный из клеток взятых из организма женщин. Эмбрионы успешно приживаются, прикрепляясь к стенкам лабораторных маток, и начинают активно развиваться. Однако, эксперименты пока прекращают на стадии нескольких дней роста эмбриона, поскольку эти опыты находится противоречии с законом об искусственном оплодотворении.

Искусственные матки-капсулы возможно будут выглядеть таким образом

"Мы надеемся завершить процесс создания искусственных маток с использованием открытой нами методики уже через несколько лет", - заявила доктор Хан-Чин Лиу из Центра репродуктивной медицины и искусственного осеменения Корнельского университета. – Теперь женщины, страдающие дефектом матки или ее недоразвитием, впервые смогут иметь собственных детей".

Очевидный прогресс в этой области одновременно ставит ученых в трудное положение. С одной стороны, искусственные матки, наконец, положат конец различным проблемам, связанным с деторождением, но, в другой стороны, они же создадут массу проблем этического характера, которым посвящена крупнейшая научная конференция "Конец естественному материнству?" открывающаяся в Оклахоме на будущей недели.

Масло в огонь подливают воинствующие феминистки, которые заявляют о том, что с появлением искусственных маток мужчины смогут полностью отказаться от женщин, убрав их с лица земли, но, сохранив возможность, воспроизводить женские особи.

Работа доктора Лиу заключается в правильном отделении клеток, выстилающих женское лоно, и выращивании их в лабораторных условиях, используя гормоны и иные факторы роста.

Вслед за этим доктор Лиу с коллегами выращивают целый покров этих клеток на остовах биоразрушаемых материалов, которые по форме полностью напоминают внутреннее строение женского лона. Клетки постепенно разрастаются, создавая ткань, а материал, послуживший им основой, саморазрушается под их воздействием. Затем в искусственно созданную ткань добавляют питательные вещества и гормоны, такие как эстроген.

Наконец, берутся эмбрионы, оставшиеся от программ по искусственному осеменению и вводятся во внутрь выращенных маток. Эмбрионы прикрепляются к стенкам искусственного лона и начинают расти.

Пока опыты прерывают на шестой день. Однако, в ближайшее время доктор Лиу планирует продолжить свой эксперимент, выращивая эмбрионы в течение 14 дней. Этот срок максимально разрешен законом для проведения абортов. "Для нас важно посмотреть, сможет ли у эмбрионов развиваться венозная система, а также смогут ли клетки развивать примитивную плаценту", - отмечают врачи.

Следующий этап исследования – опыты с искусственными матками собак и мышей. Если эти эксперименты окажутся удачными, ученые будут добиваться разрешения на продление срока развития человеческого зародыша.

Несколько другую методику используют японские ученые из Токийского университета. Группа профессора Йосинори Кувабара извлекает матки у коз и помещает их в стерильные пластиковые емкости, заполненные амниотической жидкостью (околоплодными водами), в которой постоянно поддерживается температура тела. Исследователи поддерживают жизнеспособность козьей матки и выращивают ее в течение 10 дней, подавая в емкости питательные вещества.

Опыты японской группы направлены на помощь тем женщинам, которые страдают от выкидышей или преждевременных родов, не имея возможности выносить плод положенный срок.

Вместе с тем, обе группы специалистов убеждены, что в искусственных матках можно выращивать зародыши все положенные девять месяцев. Ученые утверждают, что это станет возможным уже в ближайшие несколько лет. Искусственное выращивание детей даст возможность и однополым парам иметь своих собственных детей.

Пока вокруг этих опытов наворачивают массу этических проблем,ученые продолжают работу, надеясь подарить радость материнствам тем, кого природа лишила этого счастья.

По мнению некоторых футуристов, вынашивание ребенка в искусственной матке вне человеческого тела получит широкое распространение уже через 30 лет. Сторонники эктогенеза, отвергающие естественный отбор, уже проводят эксперименты по выращиванию эмбрионов животных в утробе, прикрепленной к искусственной плаценте.

Сторонники эктогенеза считают, технология позволит уменьшить количество смертей при родах, поскольку плод будет находиться под постоянным контролем. Противники направления опасаются, что неестественный способ рождения ребенка приведет к переосмыслению социальных ролей, а отсутствие контакта с матерью отрицательно скажется на развитии ребенка.

Эктогенез предполагает бестелесное выращивание организма. Технологию применяют к животным и бактериям. Для создания искусственной утробы нужна искусственная матка, которая обеспечит плод питанием, и амниотическая жидкость для удаления отходов из развивающегося организма. Всё это подключается к компьютеру, который полностью контролирует развитие плода.

Альтернативный метод воспроизводства может подойти женщинам, имеющим проблемы с зачатием и вынашиванием ребенка. Эктогенез также позволит отказаться от суррогатного материнства и обзавестись детьми в любом возрасте.

С другой стороны, женщинам, решившим сделать аборт, будет предложено поместить эмбрион в искусственную матку для последующего выращивания. После рождения этот ребенок может быть передан в приемную семью. С развитием эктогенеза также изменится представление о традиционной семье - одиноких родителей станет больше.

Американо-венгерский футуролог Золтан Иcтван рассказал в интервью интернет-изданию Motherboard, что использование технологий эктогенеза станет возможным в течение ближайших 20 лет. А уже через 30 лет, по его мнению, бестелесное выращивание людей будет поставлено на поток. Иcтван отмечает, что большая часть необходимых для этого технологий уже существует, процесс затягивают юридические вопросы и проблемы нравственного и этического характера. Ну а там подоспеет и искусственный интеллект .

Ученые впервые смогли вырастить живую конечность в лабораторных условиях. Когда пришитая к телу крысы конечность наполнилась кровью, животное начало шевелить своей новой лапой. Достижение Массачусетской общей больницы (Massachusetts General Hospital) позволит по требованию выращивать замену ампутированным конечностям.

Эксперты в области регенерации органов и частей тела высоко оценили достижение своих коллег, назвав это превращение фантастики в реальность. Авторы исследования, в свою очередь, заявили, что разработанная ими технология позволяет выращивать как верхние, так и нижние конечности.

Сейчас люди, потерявшие свои конечности из-за болезни, несчастного случая или в ходе военных действий, могут восстановить свои утраченные части тела с помощью протезирования или трансплантации. Однако движения высокотехнологичных протезов все еще выглядят не настолько естественно, как хотелось бы. В случае пересадки конечностей пациенты должны принимать мощные иммунодепрессанты, которые ослабляют иммунную систему. Это нужно для того, чтобы организм не отторг трансплантат.

Ученые обещают, что конечности, выращенные в лабораторных условиях, будут выглядеть более естественно, а их движения будут отличаться повышенной плавностью. А поскольку они создаются из собственных клеток пациента, им не требуется иммунодепрессия.

Каркасом для новой конечности послужила лапа мертвой крысы. Ее обработали специальным раствором, чтобы остановить деление клеток. Затем рабочий материал поместили в контейнер с добавлением здоровых кровеносных сосудов, мышечных клеток, необходимых питательных веществ и кислорода. Спустя две-три недели, как пишет New Scientist, конечность была восстановлена.

После присоединения к телу живой крысы конечность быстро наполнилась кровью. Крыса смогла управлять своей новой лапой.

Ученые говорят, что еще предстоит проделать немало работы, прежде чем они будут готовы тестировать выращенные в пробирке конечности на человеке. По их оценкам, на это уйдет как минимум десять лет.

По мнению некоторых футуристов, уже через 30 лет людей начнут массово выращивать вне тела.

Благодаря работам нобелевских лауреатов 2012 года в области медицины и физиологии уже в недалеком будущем можно будет выращивать ткани и органы для человеческого организма.

Если говорить языком официального сообщения Шведской королевской академии наук, британский ученый Джон Гeрдон и японский ученый Синья Яманака получили Нобелевскую премию за «открытие возможности перепрограммирования зрелых клеток в плюрипотентные». По-простому - за доведение возможности искусственного получения стволовых клеток. Стволовые клетки теперь, как говорят, у многих людей на слуху. С ними связывают надежды на революционные изменения в медицине, когда можно будет выращивать вне организма «запчасти» для тела человека. Растолковать «на мужицкий ум», что такое стволовые клетки и в чем суть научного прорыва нобелевских лауреатов, согласился заведующий отделом Института биологии ткани НАН Украины, доктор биологических наук, профессор, член-корреспондент НАН Украины Ростислав Стойка.

В нашем организме, - говорит Ростислав Степанович, - есть небольшое количество клеток, которые не имеют своего «лица», своей специализации, но имеют неограниченный потенциал развития и размножения. При определенных обстоятельствах они могут развиться в клетки любой ткани или органа. Если эти «неопределенные» клетки поместить, скажем, в сердечную мышцу, то они вступят признаков клеток сердечной мышцы, в головном мозге - клеток этого жизненно важного органа. Речь - о так называемые стволовые клетки.

- Сколько вообще клеток в нашем организме?

По очень сложный организм человека - не так уж и много, 85 триллионов. Но каждый отмирают более десяти миллиардов клеток. На место отмерших и поврежденных становятся потомки стволовых клеток.

- Сколько раз может делиться клетка, возникающая из стволовой?

Может быть 50-150 делений. Генетическая программа всех клеток, за исключением стволовых, многих раковых и незначительного количества других типов клеток функционирует так, что в хромосомах клетка укорачивается на своих концах (теломер) с каждым делением. Поскольку со старением клетки (а ее «возраст» определяется количеством делений клетки на ее жизненном пути) в ее генетическом материале (ДНК) накапливаются мутации с негативными последствиями. Такая «постарела» (а также повреждена внешними факторами инфицирован некоторыми опасными вирусами) клетка прибегает к апоптозу. Это - своеобразное «самоубийство» клетки с тем, чтобы не допустить превращения генетически поврежденных клеток в раковые. Итак, клетка микроскопических размеров (10-20 мкм) с помощью апоптоза заботится о здоровье всего организма.

- Какой прорыв в биологической науке совершили нобелевские лауреаты 2012 года?

Еще 1962 года Джон Гердон провел эксперимент, заменив ядро??(здесь содержится епентичний материал в виде ДНК) оплодотворенной яйцеклетки лягушки на ядро, взятое из специализированной клетки ее же кишечника. В результате из многократного деления такой измененной яйцеклетки впоследствии развивались нормальные головастики. Позже подобный эксперимент провели с использованием оплодотворенной яйцеклетки мыши, и также было получено полноценный организм этого вида животных. Этими опытами ученый доказал, что в геноме (сумма всех генов определенного вида организма) узкоспециализированных клеток хранится информация, которой вполне достаточно для обеспечения функционирования всех других клеток сложного организма. Второй лауреат Нобелевской премии Синья Яманака, значительно моложе по возрасту, в 2006 году опубликовал результаты исследований, которыми доказал, что активировав функционирование лишь четырех генов так называемых транскрипционных факторов (это - регуляторы интенсивности функционирования генов) клеток соединительной ткани, их можно превратить в стволовые клетки, из которых в дальнейшем могут развиваться любые клетки тканей и органов человека.

- Речь идет о будущем альтернативу традиционной трансплантации органов?

Именно так. Во-первых, не хватает донорских органов - почки, сердца, печени, суставов, глаз, и этот дефицит будет только расти. Во-вторых, операции по пересадке органов чрезвычайно дороги. Во время этих операций приходится использовать иммуносупрессанты, необходимые для подавления иммунной системы, чтобы не было отторжения чужеродного органа. Далее, современный человек настолько инфицирован, прежде вирусами, заменив какой-то орган, можно привнести в организм человека угрожающую инфекцию. Человек с угнетенным иммунитетом может банально подхватить воспаление легких или другую инфекцию. В то же время, трансформировав собственные клетки пациента в стволовые, мы избегаем необходимости применения иммуносупрессантов при трансплантации.

- Есть уже примеры выращивания из стволовых клеток целых органов человека, скажем, сердца, печени, почек?

Ближе всех к успеху - «выращивание» вне организма искусственной почки. Описанные примеры (пока экспериментальные) выращивания из стволовых клеток высокоспециализированных спермальних клеток, клеток иммунной системы, клеток тканей кожи. Последние незаменимы при устранении негативных последствий масштабных ожогов поверхности тела человека.

- Говорят, наука должна просчитывать возможные отдаленные риски той или иной новации …

Да, кроме уже упомянутых, одна из серьезных опасностей заключается в возможности преобразования трансплантированных стволовых клеток в злокачественные опухолевые клетки, которые, кстати, также имеют относительно неограниченный потенциал к размножению.

И все же, можно надеяться, что лет через 50 замена больных человеческих органов на новые, выращенные из стволовых клеток, станет обычной практикой?

Думаю, это произойдет значительно раньше, лет через 10.

Из досье Ростислава Стойка

Ростислав Стойка родился 23 мая 1950 года. Окончил с отличием биологический факультет Львовского государственного университета имени Ивана Франко, где является профессором кафедры биохимии. Специалист в области биохимии, клеточной и молекулярной биологии. Начал в Украину исследования механизмов программируемой клеточной смерти - апоптоза. Работал в научных центрах США, выполнял научные проекты Королевской академии наук Швеции. Соавтор шести монографий, в т.ч. «Апоптоз и рак: от теории к практике».

21 октября 2016 в 19:21

Японские ученые вырастили яйцеклетки из мышиных клеток кожи

• Научно-популярное

Японские ученые смогли превратить клетки кожи мыши в яйцеклетки, а затем вырастить из них здоровое потомство. Это первое создание половой клетки вне тела млекопитающего. Если этот процесс можно будет повторить для людей, возможно в будущем человечество сможет решить проблему бесплодия.

Катсухико Хаяси, репродуктивному биологу из университета Кюсю в Фукуоке, совместно со специалистом в области стволовых клеток Митинори Сайто удалось сначала перепрограммировать стволовые клетки в эмбриональные , а их в примордиальные зародышевые клетки (ПЗК). Эти клетки появляются, когда эмбрион начинает развиваться, и позже они дают начало сперматозоидам и яйцеклеткам. Раньше исследователям нужно было переносить их в яичники живых мышей, чтобы они могли там окончательно развиться. Однако теперь необходимость в этом отпала. Метод Сайто и Хаяси позволяет ученым создавать неограниченное количество ПЗК, которые ранее было трудно получить. Это открытие стимулировало исследования в области воспроизводства млекопитающих.

У мышей зародышевые клетки появляются на первой неделе эмбрионального развития, в количестве примерно 40. Эта небольшая группа продолжает формировать десятки тысяч яйцеклеток, которые самки мышей имеют при рождении, и миллионы клеток спермы у самцов.

За 10 лет кропотливой работы Сайто и его команда выявили несколько генов – Stella, Blimp1 и Prdm14, которые в определенной комбинации играют решающую роль в развитии ПЗК. Используя эти гены в качестве маркеров, они могли выбрать ПЗК из числа других клеток и изучить, что с ними происходит. В 2009 году во время экспериментов в Центре биологии развития при Институте физико-технических исследований (RIKEN) в Кобе было установлено, что при соблюдении всех условий, необходимых для культивирования, добавление костного морфогенетического белка Bmp4 в строго определенное время приводит к преобразованию эмбриональных стволовых клеток в ПЗК. Чтобы проверить этот принцип, Сайто добавил высокую концентрацию Bmp4 в эмбриональные клетки, и почти все из них превратились в ПЗК. Он и другие ученые ожидали, что процесс будет более сложным.

Позже к Сайто присоединился Хаяси, который попытался использовать клетки эпибласта - многоклеточного зародыша, имеющего однослойное строение – отправную точку Сайто. Но вместо того, чтобы использовать отдельные клетки, как это делал его коллега, он попытался взять устойчивую клеточную линию, которая может воспроизвести ПЗК. Это не сработало. После неудачи Хаяси продвинулся в другом исследовании, которое показало, что молекулы активина А и основной фактор роста фибропластов могут преобразовать выведенные ранее эмбриональные стволовые клетки в клетки, сродни эпибластам. Так появилась идея использовать два эти фактора, чтобы побудить эмбриональные клетки дифференцироваться в эпибласты, а затем применить предыдущую формулу Сайто, чтобы подтолкнуть получившиеся клетки превратиться в ПЗК. Такой подход оказался успешным. Чтобы проверить, смогут ли эти клетки развиться в жизнеспособные сперматозоиды и яйцеклетки, Сайто внедрил их в семенники мышей, которые не могли вырабатывать сперму естественным путем, и таким образом им восстановили фертильность. Затем команда осеменила искусственно созданными сперматозоидами обычные яйцеклетки. В результате получилось здоровое потомство.

Следующий большой прорыв в исследованиях произошел в 2016 году, когда команда во главе с Яёй Обата из Токийского университета сельского хозяйства сообщила о трансформации ПЗК, выделенных из эмбрионов мышей, в ооциты (яйцеклетки) без участия млекопитающего. Работая с Обата, Хаяси и Сайто завершили цикл: от клеток кожи они пришли к функционирующим яйцеклеткам в пробирке. При использовании экстракорпорального оплодотворения на свет появились 26 здоровых мышат. Часть из них родилась из изначально имеющихся эмбриональных стволовых клеток, а другая от перепрограммированных клеток кожи. Хаяси говорит, что некоторые из них затем родили второе поколение мышей. «Части этой работы были сделаны ранее – здесь их собрали воедино. То, что они смогли получить здоровое потомство - впечатляет» - отмечает Дитер Эгли, биолог из института Нью-Йоркского фонда стволовых клеток.

Восстановление недостающей конечности не имеет большого значения для морской звезды или саламандры - существ, которые обладают регенеративными способностями для замены пропавших рук и хвостов. Но они не единственные животные, которые могут восстановить поврежденные части тела. Олень может вырастить до 30 килограммов рогов всего за три месяца. У рыбок рерио может вырасти свое сердце, а плоские черви продемонстрировали, что могут восстановить свои собственные головы.

А для людей, что пропало, то пропало - или нет?

Выращенные в лаборатории

Отдельные клетки в вашем теле постоянно заменяются, когда изнашиваются, процесс, который замедляется со старением, но продолжается на протяжении всей жизни человека. Вы можете даже наблюдать эту частую и видимую регенерацию в одном из ваших органов: вашей коже. По словам Американского химического общества, люди меняют весь внешний слой кожи каждые две-четыре недели, теряя около 510 г клеток кожи в год.

Однако регенерация полных органов и частей тела, обычная практика среди «повелителей времени» сериала «Доктор Кто», выходит за рамки человеческой биологии. Но в последние годы ученые успешно культивировали целый ряд структур человеческого тела, аналогичные структуры были успешно протестированы на животных, и мелкие человеческие органы, известные как «органоиды», которые используются для изучения функции и структуры человеческого органа при уровне детализации, который ранее был невозможным. Вот несколько недавних примеров.

Фаллопиевы трубы

Используя стволовые клетки, ученые из Института иммунологической биологии им. Макса Планка в Берлине выращивали глубокий клеточный слой человеческих фаллопиевых труб, структур, которые соединяют яичники и матку. В заявлении, опубликованном 11 января, исследователи описывают полученные органоиды как имеющие общие черты и формы, характерные для полноразмерных фаллопиевых труб.

Минимозг

Созданный лабораторией мозг размером с карандашный ластик культивировался из клеток кожи учеными Университета штата Огайо и структурно и генетически подобен мозгу 5-недельного человеческого плода. Описанный как «заменитель мозга» представителями университета в заявлении от 18 августа, органоид имеет функционирующие нейроны с сигнальными удлинениями, такими как аксоны и дендриты. На фотографии минимозга метки идентифицируют структуры, которые обычно встречаются в мозге плода.

Минисердце

Исследователи подсказали, что стволовые клетки развиваются в сердечную мышцу и соединительную ткань, а затем организуются в крошечные камеры и «бьются». В видеоролике сердечные мышечные клетки (обозначенные красным в центре) бьют, а соединительная ткань (зеленое кольцо) защищает органоид в блюде, где он рос. Кевин Хили, Калифорнийский университет, Беркли, профессор биоинженерии и соавтор исследования, сказал в своем заявлении. «Эта технология может помочь нам быстро создать лекарства, способные генерировать сердечные врожденные дефекты, и принимать решения о том, какие препараты опасны во время беременности». Исследование было опубликовано в марте 2015 года в журнале Nature Communications

Минипочка

Команда австралийских ученых вырастила миниатюрную почку, дифференцируя стволовые клетки, чтобы сформировать орган с тремя различными типами почек в первый раз. Исследователи выращивали органоид в процессе, который следовал нормальному развитию почек. На изображении три цвета представляют типы клеток почек, которые образуют «нефроны», различные структуры в почках.

Минилегкое

Исследователи из нескольких учреждений сотрудничали для выращивания трехмерных органоидов легких, которые развивали бронхи, или структуры дыхательных путей, и мешочки легких. «Эти миниатюры могут имитировать ответы реальных тканей и будут хорошей моделью для изучения того, как формы органов, меняются с болезнью и показывают как они могут реагировать на новые препараты», - говорит в заявлении Джейсон Р. Спенс, старший автор исследования и доцент Внутренней медицины и клеточной и развивающей биологии в Медицинской школе Мичиганского университета. Минилегкие выжили в лаборатории более 100 дней.

Минижелудок

Минижелудки выращивали около месяца в чашке Петри, они сформировали «овальные формы, полые структуры», похожие на один из двух разделов желудка, сказал Джим Уэллс, соавтор исследования и профессор биологии развития в Медицинском центре Детской больницы Цинциннати. Уэллс сообщает, что крошечные желудки размером 3 миллиметра в диаметре, будут особенно полезны ученым, изучающих влияние определенной бактерии, вызывающей желудочное заболевание. Это потому, что бактерии ведут себя по-разному у животных, - сказал он.

Вагина

В апреле 2014 года в исследовании, опубликованном в журнале The Lancet, были описаны успешные трансплантации лабораторных вагин, созданные путем выращивания клеток пациенток. Пересадки, проведенные несколькими годами ранее у четырех девушек и молодых женщин в возрасте от 13 до 18 лет, исправили врожденный дефект, при котором влагалище и матка отсутствуют или недостаточно развиты. В течение восьми лет после пересадки проводили обследование, в течение которых органы функционировали нормально и позволяли иметь безболезненное сношение.

Половой член

Ученые из Института восстановительной медицины Уэйк-Форест использовали клетки кроликов для выращивания эректильной ткани полового члена, пересадки лабораторных пенисов на самцов кроликов, которые затем успешно спаривались. Но процесс все еще находится на экспериментальных этапах, и требуется утверждение от Управления по контролю за продуктами и лекарствами США, чтобы команда расширила свою работу и включила человеческую ткань. Институт Восстановительной медицины Вооруженных Сил США предоставляет деньги для исследования, так как оно может принести пользу солдатам, пострадавшим от паховых травм в бою.

Пищевод

В Кубанском государственном медицинском университете в Краснодаре международная команда ученых построила рабочий пищевод путем выращивания стволовых клеток в течение трех недель. Они затем успешно имплантировали орган крысе. Ученые протестировали новый пищевод на прочность, раздувая и дефлируя его в 10 000 раз, внедряя искусственные структуры у 10 крыс и заменяя до 20 процентов оригинальных органов животных.

Ухо

Ученые имеют трехмерные печатные человеческие уши, культивируя их, покрывая живыми клетками, которые росли вокруг формы. Исследователи создали форму ушной формы, моделируя ухо ребенка с помощью программного обеспечения 3D, а затем отправив модель на трехмерный принтер. Как только ученые имели форму в руке, они наполнили ее коктейлем из живых клеток уха и коллагена коров, получив ухо. Затем изготовленные уши имплантировали крысам в течение одного-трех месяцев, в то время как ученые оценивали изменения в размере и форме по мере роста органов.

Клетки печени

Печень, самый крупный орган внутри человеческого тела, способна совершать большие подвиги восстановления, находясь на своем месте. Вне тела орган ведет себя по-другому. Ученым было чрезвычайно сложно выращивать клетки печени, называемые гепатоцитами, и сохранять живыми. Впервые ученые из Германии и Израиля успешно культивировали гепатоциты в лаборатории, опубликовав свои исследования 26 октября 2015 года в журнале Nature Biotechnology. Хотя это не полноценный орган (или даже органоид), это развитие имеет многообещающие последствия для клинического исследования, с Яаком Нахмиасом, директором Центра биоинженерии Александра Грасса в Еврейском университете в Иерусалиме и ведущим автором исследования, описывающим его в Заявление как «святой Грааль исследований печени».

В В Е Д Е Н И Е

Выращивание органов и его альтернативы

Многие болезни, в том числе, угрожающие жизни человека, связаны с нарушениями в деятельности конкретного органа (например, почечная недостаточность, сердечная недостаточность, сахарный диабет и др.). Далеко не во всех случаях эти нарушения можно исправить с помощью традиционных фармакологических или хирургических воздействий.

Существует ряд альтернативных способов того, как восстановить функции органов пациентам в случае серьёзного поражения:

1) Стимуляция процессов регенерации в организме. Кроме фармакологических воздействий в практике применяется процедура введения в организм стволовых клеток, которые имеют способность к превращению в полноценные функциональные клетки организма. Уже получены положительные результаты при лечении с помощью стволовых клеток самых разных заболеваний, в том числе, наиболее распространенных в обществе заболеваний, таких, как инфаркты, инсульты, нейродегенеративные заболевания, диабет и другие. Однако ясно, что такой способ лечения применим лишь для устранения относительно небольших повреждений органов.

2) Восполнение функций органов с помощью аппаратов не биологического происхождения. Это могут быть крупных размеров аппараты, к которым больные подключаются на определенное время (например, аппараты для гемодиализа при почечной недостаточности). Также имеются модели носимых устройств, или устройств, имплантируемых внутрь организма (существуют варианты сделать это, оставив собственный орган пациента, однако, иногда его удаляют, и аппарат полностью берёт на себя его функции, как в случае использования искусственного сердца AbioCor ). Подобные приспособления в ряде случаев используют на время ожидания появления необходимого донорского органа. Пока не биологические аналоги значительно уступают по совершенству естественным органам.

3) Использование донорских органов. Донорские органы, пересаживаемые от одного человека к другому, уже широко и порою успешно применяются в клинической практике. Однако это направление сталкивается с рядом проблем, таких, как серьёзный дефицит донорских органов, проблема реакции отторжения чужого органа иммунной системой и др. Уже были попытки пересаживать человеку органы животных (это называется ксенотрансплантацией), но пока успехи в применении такого способа скромные и в регулярную практику он не внедрён. Однако ведутся исследования с целью повысить эффективность ксенотрансплантации, например, посредством генетической модификации.

4) Выращивание органов. Органы могут выращиваться искусственно как в теле человека, так и вне организма. В ряде случаев имеется возможность выращивать орган из клеток того человека, которому его собираются трансплантировать. Разработан ряд методов выращивания биологических органов, например, с помощью специальных приборов, работающих по принципу 3D принтера. К рассматриваемому направлению можно отнести предложение о возможности выращивания, для замены повреждённого тела человека с сохранившимся мозгом, самостоятельно развивающегося организма, клона - “растения” (с отключенной способностью мыслить).

Среди перечисленных четырёх вариантов решения проблемы недостаточности функций органов именно их выращивание может быть наиболее естественным для организма способом восстановления при крупных повреждениях.

В настоящем тексте приводится информация о существующих достижениях в выращивании биологических органов.

Д О С Т И Ж Е Н И Я И П Е Р С П Е К Т И В Ы В В Ы Р А Щ И В А Н И И О Т Д Е Л Ь Н Ы Х О Р Г А Н О В

Д Л Я Н У Ж Д М Е Д И Ц И Н Ы

Выращивание тканей

Выращивание простых тканей – уже существующая и использующаяся в практике технология.

Кожа

Восстановление повреждённых участков кожи уже является частью клинической практики. В ряде случаев используются методы регенерации кожи самого человека, например, пострадавшего от ожога посредством специальных воздействий. Это например разработанный Р.Р. Рахматуллиным биопластический материал гиаматрикс 1 , или биокол 2 , разработанный коллективом под руководством Б.К. Гаврилюка. Для выращивания кожи на месте ожога также используются специальные гидрогели 3 .

Также развиваются методы распечатки фрагментов ткани кожи с помощью специальных принтеров. Созданием таких технологий занимаются, например, разработчики из американских центров регенерационной медицины AFIRM 4 и WFIRM 5 .

Доктор Герлах (Jorg Gerlach) с коллегами из Института регенеративной медицины при Университете Питсбурга (Institute for Regenerative Medicine at the University of Pittsburg) изобрели устройство для пересадки кожи, которое поможет людям быстрее излечиться от ожогов различной степени тяжести. Skin Gun распыляет на поврежденную кожу пострадавшего раствор с его же стволовыми клетками. На данный момент новый метод лечения находится на экспериментальной стадии, но результаты уже впечатляют: тяжелые ожоги заживают буквально за пару дней. 6

Кости

Группа сотрудников Колумбийского университета под руководством Горданы Вуньяк-Новакович (Gordana Vunjak-Novakovic) получила из стволовых клеток, засеянных на каркас, фрагмент кости, аналогичный части височно-нижнечелюстного сустава. 7

Учёные израильской компании Bonus Biogroup 8 (основатель и исполнительный директор - Шай Мерецки, Shai Meretzki ) разрабатывают методы выращивания человеческой кости из жировой ткани пациента, полученной посредством липосакции. Выращенную таким образом кость уже удалось успешно пересадить в лапу крысы.

Зубы

Итальянским ученым из University of Udine удалось показать, что полученная из единственной клетки жировой ткани популяция мезенхимальных стволовых клеток invitro даже в отсутствие специфического структурного матрикса или подложки может быть дифференцирована в структуру, напоминающую зубной зачаток. 9

В Токийском университете учёные вырастили из стволовых клеток мышей полноценные зубы, имеющие зубные кости и соединительные волокна, и успешно трансплантировали их в челюсти животных. 10

Хрящи

Специалистам из Медицинского центра Колумбийского университета (Columbia University Medical Center) под руководством Джереми Мао (Jeremy Mao) удалось добиться восстановления суставных хрящей кроликов.

Сначала исследователи удалили животным хрящевую ткань плечевого сустава, а также находящийся под ней слой костной ткани. Затем на место удаленных тканей им были помещены коллагеновые каркасы.

У тех животных, у которых каркасы содержали трансформирующий фактор роста - белок, который контролирует дифференцировку и рост клеток, вновь сформировалась костная и хрящевая ткань на плечевых костях, а движения в суставе полностью восстановились. 11

Группе американских ученых из The University of Texasat Austin удалось продвинуться в создании хрящевой ткани с меняющимися в разных участках механическими свойствами и составом внеклеточного матрикса. 12

В 1997 году, Хирургу Джею Ваканти (Jay Vscanti) из Главной больницы Массачусетса в Бостоне удалось вырастить на спине у мыши человеческое ухо, используя клетки хряща. 13

Медики Университета Джона Хопкинса удалили пораженное опухолью ухо и часть черепной кости у 42-летней женщины, страдающей раком. Используя хрящевую ткань из грудной клетки, кожу и сосуды из других частей тела пациентки, они вырастили ей искусственное ухо на руке и затем пересадили в нужное место. 14

Сосуды

Исследователи из группы профессора Ин Чжэн (Ying Zheng) вырастили в лаборатории полноценные сосуды, научившись управлять их ростом и формировать из них сложные структуры. Сосуды формируют ветвления, нормальным образом реагируют на суживающие вещества, транспортируя кровь даже через острые углы. 15

Ученые во главе с заведующим кафедрой в Университете Райса Дженнифер Вест (Jennifer West) и молекулярным физиологом из Медицинского колледжа Бэйлора (Baylor College of Medicine - BCM) Мэри Дикинсон (Mary Dickinson) нашли свой способ выращивать кровеносные сосуды, в том числе капилляры с использованием в качестве базового материала полиэтиленгликоля (PEG) – нетоксичного пластика. Ученые модифицировали PEG, имитируя экстрацеллюлярный матрикс организма.

Затем они соединили его с двумя видами клеток, необходимыми для образования кровеносных сосудов. Используя свет, превращающий полимерные нити PEG в трехмерный гель, они получили мягкий гидрогель, содержащий живые клетки и ростовые факторы. В результате ученые смогли наблюдать за тем, как клетки медленно образуют капилляры во всей массе геля.

Чтобы протестировать новые сети кровеносных сосудов, ученые имплантировали гидрогели в роговицу глаза мышей, где отсутствует естественное кровоснабжение. Введение красителя в кровь животных подтвердило существование нормального кровотока во вновь образовавшихся капиллярах. 16

Шведские врачи из университета Готенбурга под руководством профессора Сухитры Сумитран-Хольгешон (Suchitra Sumitran-Holgersson) впервые в мире провели операцию по пересадке вены, выращенной из стволовых клеток пациента. 17

Участок подвздошной вены длиной около 9 сантиметров, полученный от умершего донора, был очищен от донорских клеток. Внутрь оставшегося белкового каркаса поместили стволовые клетки девочки. Через две недели была проведена операция по пересадке вены с выросшей в ней гладкой мускулатурой и эндотелием.

Прошло больше года с момента операции, антител к трансплантату в крови пациентки обнаружено не было и самочувствие ребёнка улучшилось.

Мышцы

Сотрудники Вустерского политехнического института (США) успешно ликвидировали большую рану в мышечной ткани у мышей путём выращивания и вживления состоящих из белкового полимера фибрина микронитей, покрытых слоем человеческих мышечных клеток. 18

Израильские ученые из Technion-Israel Institute of Technology исследуют необходимую степень васкуляризации и организации ткани invitro, позволяющую улучшить приживаемость и интеграцию тканеинженерного васкуляризированного мышечного импланта в организме реципиента. 19

Кровь

Исследователи из Университета Пьера и Марии Кюри в Париже под руководством Люка Дуая (Luc Douay) впервые в мировой практике успешно испытали на людях-добровольцах искусственную кровь, выращенную из стволовых клеток.

Каждый из участников эксперимента получил по 10 миллиардов эритроцитов, что эквивалентно примерно двум миллилитрам крови. Уровни выживаемости полученных клеток оказались сопоставимы с аналогичными показателями обычных эритроцитов. 20

Костный мозг

Искусственный костный мозг, предназначенный для производства in vitro клеток крови, впервые успешно был создан исследователями в лаборатории химической инженерии Мичиганского Университета (University of Michigan ) под руководством Николая Котова (Nicholas Kotov ). С его помощью уже можно получать гемопоэтические стволовые клетки и В-лимфоциты – клетки иммунной системы, продуцирующие антитела. 21

Выращивание сложных органов

Мочевой пузырь.

Доктор Энтони Атала (Anthony Atala) и его коллеги из американского университета Вэйк Форест (Wake Forest University) занимаются выращиванием мочевых пузырей из собственных клеток пациентов и их трансплантацией пациентам. 22 Они отобрали нескольких пациентов и взяли у них биопсию пузыря - образцы мышечных волокон и уротелиальных клеток. Эти клетки размножались семь-восемь недель в чашках Петри на имеющем форму пузыря основании. Затем выращенные таким способом органы были вшиты в организмы пациентов. Наблюдения за пациентами в течении нескольких лет показали, что органы функционировали благополучно, без негативных эффектов, характерных для более старых методов лечения. Фактически это первый случай, когда достаточно сложный орган, а не простые ткани, такие, как кожа и кости, был искусственно выращен in vitro и пересажен в человеческий организм. Так же этот коллектив разрабатывает методы выращивания других тканей и органов.

Трахея.

Испанские хирурги провели первую в мире трансплантацию трахеи, выращенной из стволовых клеток пациентки - 30-летней Клаудии Кастильо (Claudia Castillo). Орган был выращен в университете Бристоля (University of Bristol) на основе донорского каркаса из коллагеновых волокон. Операцию провёл профессор Паоло Маккиарини (Paolo Macchiarini) из госпиталя Барселоны (Hospital Clínic de Barcelona). 23

Профессор Маккиарини активно сотрудничает с Российскими исследователями, что позволило сделать первые операции по пересадке выращенной трахеи в России. 24

Почки

Компания Advanced Cell Technology в 2002 г. сообщила об успешном выращивании полноценной почки из одной клетки, взятой из уха коровы с использованием технологии клонирования для получения стволовых клеток. Применяя специальное вещество, стволовые клетки превратили в почечные.

Ткань вырастили на каркасе из саморазрушающегося материала, созданного в Гарвардской медицинской школе и имеющего форму обычной почки.

Полученные в результате почки около 5 см в длину были имплантированы корове рядом с основными органами. В результате искусственная почка успешно начала вырабатывать мочу. 25

Печень

Американские специалисты из Массачусетской больницы общего профиля (Massachusetts General Hospital) под руководством Коркута Югуна (Korkut Uygun) успешно пересадили нескольким крысам печень, выращенную в лаборатории из их собственных клеток.

Исследователи удалили печени у пяти лабораторных крыс, очистили их от клеток хозяина, получив, таким образом, соединительнотканные каркасы органов. Затем в каждый из пяти полученных каркасов исследователи ввели примерно по 50 миллионов клеток печени, взятых у крыс-реципиентов. В течение двух недель на каждом из заселенных клетками каркасов сформировалась полностью функционирующая печень. После чего выращенные в лаборатории органы были успешно пересажены пяти крысам. 26

Сердце

Ученые из британского госпиталя Хэафилд под руководством Мегди Якуба впервые в истории вырастили часть сердца, использовав в качестве "строительного материала" стволовые клетки. Врачи вырастили ткань, которая работала в точности как сердечные клапаны, ответственные за кровоток в организме людей. 27

Ученые из University of Rostock (Германия) использовали технологию лазерного переноса-печатания клеток (Laser-Induced-Forward-Transfer (LIFT) cellprinting) для изготовления “заплатки”, предназначенной для регенерации сердца. 28

Легкие

Американские ученые из Йельского университета (Yale University) под руководством Лауры Никласон (Laura Niklason) вырастили в лаборатории легкие (на донорском внеклеточном матриксе).

Матрикс был заполнен клетками эпителия легких и внутренней оболочки кровеносных сосудов, взятых у других особей. С помощью культивации в биореакторе исследователям удалось вырастить новые легкие, которые затем пересадили нескольким крысам.

Орган нормально функционировал у разных особей от 45 минут до двух часов после трансплантации. Однако после этого в сосудах легких начали образовываться тромбы. Кроме того, исследователи зафиксировали утечку небольшого количества крови в просвет органа. Тем не менее, исследователям впервые удалось продемонстрировать потенциал регенеративной медицины для трансплантации лёгких. 29

Кишечник

Группе японских исследователей из Медицинского университета Нара (Nara Medical University ) под руководством Есиюки Накадзимы (Yoshiyuki Nakajima ) удалось создать фрагмент кишечника мыши из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток.

Его функциональные особенности, структура мышц, нервных клеток соответствуют обычному кишечнику. Например, он мог сокращаться для перемещения пищи. 30

Поджелудочная железа

Исследователи израильского института Technion, работающие под руководством профессора Шуламит Левенберг (Shulamit Levenberg), разработали метод выращивания ткани поджелудочной железы, содержащей секреторные клетки, окруженные трехмерной сетью кровеносных сосудов.

Трансплантация такой ткани мышам с диабетом приводила к значительному снижению уровней глюкозы в крови животных. 31

Тимус

Ученые из University of Connecticut Health Center (США) разработали метод направленной дифференцировки invitro мышиных эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) в клетки-предшественники эпителия тимуса (ПЭТ), которые invivo дифференцировались в клетки тимуса, и восстанавливали его нормальное строение. 32

Предстательная железа

Ученые Пру Кауин, профессор Гейл Рисбриджер и доктор Рения Тейлор из Мельбурнского института медицинских исследований Monash, стали первыми, кому с помощью стволовых эмбриональных клеток удалось вырастить человеческую простату в теле мыши. 33

Яичник

Группе специалистов под руководством Сандры Карсон (Sandra Carson ) из университета Брауна удалось вырастить первые яйцеклетки в органе, созданном в лаборатории: пройден путь от стадии «молодого граафова пузырька» до полного взросления. 34

Пенис, уретра

Исследователям из Института регенеративной медицины Уэйк-Фореста (Северная Каролина, США) под руководством Энтони Атала (Anthony Atala) удалось вырастить и успешно пересадить пенисы кроликам. После операции функции пенисов восстановились, кролики оплодотворили самок, у них родилось потомство. 35

Ученые из Университета Уэйк-Форест в Уинстон-Сейлеме, штат Северная Каролина, вырастили мочеиспускательные каналы из собственных тканей больных. В эксперименте они помогли пятерым подросткам восстановить целостность поврежденных каналов. 36

Глаза, роговицы, сетчатки

Биологи из Токийского университета имплантировали в глазницу лягушки, из которой было удалено глазное яблоко, эмбриональные стволовые клетки. Затем глазницу заполнили специальной питательной средой, обеспечивавшей питание клеток. Через несколько недель эмбриональные клетки переросли в новое глазное яблоко. Причем восстановился не только глаз, но и зрение. Новое глазное яблоко срослось со зрительным нервом и питающими артериями, полностью заместив прежний орган зрения. 37

Учeные из Caлгрeнcкoй Aкaдeмии в Швeции (The Sahlgrenska Academy) впeрвыe уcпeшно культивирoвaли из cтвoлoвых клeтoк чeлoвeчecкую рoгoвицу. Этo в будущeм пoмoжeт избeжaть дoлгoго oжидaния дoнoрcкoй роговицы. 38

Исследователи университета Калифорнии в Ирвине, работающие под руководством Ганса Кайрштеда (Hans Keirstead ), вырастили из стволовых клеток в лабораторных условиях восьмислойную сетчатку, что поможет в разработке готовых к трансплантации сетчаток для лечения таких ведущих к слепоте заболеваний, как пигментный ретинит и макулярная дегенерация. Сейчас они проверяют возможность трансплантации такой сетчатки на животных моделях. 39

Нервные ткани

Исследователи Центра биологии развития RIKEN, Кобе, Япония под руководством Йошики Сасаи разработали методику выращивания гипофиза из стволовых клеток, который успешно имплантировали мышам. Проблему создания двух типов тканей ученые решили воздействуя на мышиные эмбриональные стволовые клетки веществами, создающими среду, похожую на ту, в которой формируется гипофиз развивающегося эмбриона, и обеспечили обильное снабжение клеток кислородом. В результате клетки сформировали трехмерную структуру, внешне сходную с гипофизом, содержащую комплекс эндокринных клеток, секретирующих гипофизарные гормоны. 40

Ученые лаборатории клеточных технологий Нижегородской государственной медицинской академии сумели вырастить нейронную сеть, фактически фрагмент мозга. 41

Вырастили они нейронную сеть на специальных матрицах – многоэлектродных подложках, которые позволяют снимать электрическую активность этих нейронов на всех этапах роста.

З А К Л Ю Ч Е Н И Е

Приведённый обзор публикаций показывает, что уже имеются существенные достижения в использовании выращивания органов для лечения людей не только простейших тканей, таких, как кожа и кости, но и достаточно сложных органов, таких, как мочевой пузырь, или трахея. Технологии выращивания ещё более сложных органов (сердце, печень, глаз и др.) пока отрабатываются на животных. Кроме применения в трансплантологии, такие органы могут послужить, например, для экспериментов, заменяющих некоторые эксперименты на лабораторных животных, или же для нужд искусства (как это сделал вышеупомянутый Дж. Ваканти). Ежегодно в области выращивания органов появляются новые результаты. По прогнозам учёных разработка и внедрение техники выращивания сложных органов – вопрос времени и велика вероятность, что уже в ближайшие десятилетия техника будет отработана настолько, что выращивание сложных органов будет широко использоваться в медицине, вытеснив наиболее распространённый сейчас метод трансплантации от доноров.

Источники информации.

1Биоинженерная модель биопластического материала «гиаматрикс» Рахматуллин Р.Р., Барышева Е.С., Рахматуллина Л.Р. // Успехи современного естествознания. 2010. № 9. С. 245-246.

2Система «биокол» для регенерации ран. Гаврилюк Б.К., Гаврилюк В.Б.// Технологии живых систем. 2011. № 8. С. 79-82.

3 Sun, G., Zhang, X., Shen, Y., Sebastian, R., Dickinson, L. E., Fox-Talbot, K., et al. Dextran hydrogel scaffolds enhance angiogenic responses and promote complete skin regeneration during burn wound healing. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 108(52), 20976-20981.

7Grayson WL, Frohlich M, Yeager K, Bhumiratana S, Chan ME, Cannizzaro C, Wan LQ, Liu XS, Guo XE, Vunjak-Novakovic G: Engineering anatomically shaped human bone grafts. // Proc Natl Acad Sci U S A 2010, 107:3299-3304.

9Ferro F, etal. Adipose tissue-derived stem cell in vitro differentiation in a three-dimensional dental bud structure.Am J Pathol. 2011 May;178(5):2299-310.

10Oshima M, Mizuno M, Imamura A, Ogawa M, Yasukawa M, et al. (2011) Functional Tooth Regeneration Using a Bioengineered Tooth Unit as a Mature Organ Replacement Regenerative Therapy. // PLoS ONE 6(7): e21531.

11Chang H Lee, James L Cook, Avital Mendelson, Eduardo K Moioli, Hai Yao, Jeremy J Mao Regeneration of the articular surface of the rabbit synovial joint by cell homing: a proof of concept study // The Lancet, Volume 376, Issue 9739, Pages 440 - 448, 7 August 2010

16Saik, Jennifer E. and Gould, Daniel J. and Watkins, Emily M. and Dickinson, Mary E. and West, Jennifer L., Covalently immobilized platelet-derived growth factor-BB promotes antiogenesis in biomirnetic poly(ethylene glycol) hydrogels, ACTA BIOMATERIALIA, vol 7 no. 1 (2011), pp. 133--143

17Michael Olausson, Pradeep B Patil, Vijay Kumar Kuna, Priti Chougule, Nidia Hernandez, Ketaki Methe, Carola Kullberg-Lindh, Helena Borg, Hasse Ejnell, Prof Suchitra Sumitran-Holgersson. Transplantation of an allogeneic vein bioengineered with autologous stem cells: a proof-of-concept study. // The Lancet, Volume 380, Issue 9838, Pages 230 - 237, 21 July 2012

18Megan K. Proulx, Shawn P. Carey, Lisa M. DiTroia, Craig M. Jones, Michael Fakharzadeh, Jacques P. Guyette, Amanda L. Clement, Robert G. Orr, Marsha W. Rolle, George D. Pins, Glenn R. Gaudette. Fibrin microthreads support mesenchymal stem cell growth while maintaining differentiation potential. // Journal of Biomedical Materials Research Part A Volume 96A, Issue 2, pages 301–312, February 2011

19KofflerJ, etal. Improved vascular organization enhances functional integration of engineered skeletal muscle grafts.Proc Natl Acad Sci U S A.2011 Sep 6;108(36):14789-94. Epub 2011 Aug 30.

20Giarratana, et al. Proof of principle for transfusion of in vitro-generated red blood cells. // Blood 2011, 118: 5071-5079;

21Joan E. Nichols, Joaquin Cortiella, Jungwoo Lee, Jean A. Niles, Meghan Cuddihy, Shaopeng Wang, Joseph Bielitzki, Andrea Cantu, Ron Mlcak, Esther Valdivia, Ryan Yancy, Matthew L. McClure, Nicholas A. Kotov. In vitro analog of human bone marrow from 3D scaffolds with biomimetic inverted colloidal crystal geometry. // Biomaterials, Volume 30, Issue 6, February 2009, Pages 1071-1079 Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix. // Nature Medicine 16, 814–820 (2010)

27Philosophical Transactions of the Royal Society. Bioengineering the Heart issue. Eds Magdi Yacoub and Robert Nerem. 2007 vol 362(1484): 1251-1518.

28GaebelR, etal. Patterning human stem cells and endothelial cells with laser printing for cardiac regeneration.Biomaterials. 2011 Sep 10.

29Thomas H. Petersen, Elizabeth A. Calle, Liping Zhao, Eun Jung Lee, Liqiong Gui, MichaSam B. Raredon, Kseniya Gavrilov, Tai Yi, Zhen W. Zhuang, Christopher Breuer, Erica Herzog, Laura E. Niklason. Tissue-Engineered Lungs for in Vivo Implantation. // Science 30 July 2010: Vol. 329 no. 5991 pp. 538-541

30Takatsugu Yamada, Hiromichi Kanehiro, Takeshi Ueda, Daisuke Hokuto, Fumikazu Koyama, Yoshiyuki Nakajima. Generation of Functional Gut ("iGut") From Mouse Induced Pluripotent Stem Cells. // SBE"s 2nd International Conference on Stem Cell Engineering (2-5 May 2010) in Boston (MA), USA.

31Keren Kaufman-Francis, Jacob Koffler, Noa Weinberg, Yuval Dor, Shulamit Levenberg. Engineered Vascular Beds Provide Key Signals to Pancreatic Hormone-Producing Cells. // PLoS ONE 7(7): e40741.

32Lai L, etal. Mouse embryonic stem cell-derived thymic epithelial cell progenitors enhance T-cell reconstitution after allogeneic bone marrow transplantation.Blood.2011 Jul 26.

33Renea A Taylor, Prue A Cowin, Gerald R Cunha, Martin Pera, Alan O Trounson, + et al. Formation of human prostate tissue from embryonic stem cells. // Nature Methods 3, 179-181

34Stephan P. Krotz, Jared C. Robins, Toni-Marie Ferruccio, Richard Moore, Margaret M. Steinhoff, Jeffrey R. Morgan and Sandra Carson. In vitro maturation of oocytes via the pre-fabricated self-assembled artificial human ovary. // JOURNAL OF ASSISTED REPRODUCTION AND GENETICS Volume 27, Number 12 (2010), 743-750.

36Atlantida Raya-Rivera MD, Diego R Esquiliano MD, James J Yoo MD, Prof Esther Lopez-Bayghen PhD, Shay Soker PhD, Prof Anthony Atala MD Tissue-engineered autologous urethras for patients who need reconstruction: an observational study // The Lancet, Vol. 377 No. 9772 pp 1175-1182

38Charles Hanson, Thorir Hardarson, Catharina Ellerström, Markus Nordberg, Gunilla Caisander, Mahendra Rao, Johan Hyllner, Ulf Stenevi, Transplantation of human embryonic stem cells onto a partially wounded human cornea in vitro // Acta Ophthalmologica, Acta Ophthalmologica on 27 January 2012, DOI: 10.1111/j.1755-3768.2011.02358.x

39Gabriel Nistor, Magdalene J. Seiler, Fengrong Yan, David Ferguson, Hans S. Keirstead. Three-dimensional early retinal progenitor 3D tissue constructs derived from human embryonic stem cells. // Journal of Neuroscience Methods, Volume 190, Issue 1, 30 June 2010, Pages 63–70

40Hidetaka Suga, Taisuke Kadoshima, Maki Minaguchi, Masatoshi Ohgushi, Mika Soen, Tokushige Nakano, Nozomu Takata, Takafumi Wataya, Keiko Muguruma, Hiroyuki Miyoshi, Shigenobu Yonemura, Yutaka Oiso & Yoshiki Sasai. Self-formation of functional adenohypophysis in three-dimensional culture. // Nature 480, 57–62 (01 December 2011)

41Мухина И.В., Хаспеков Л.Г. Новые технологии в экспериментальной нейробиологии: нейронные сети на мультиэлектродной матрице. Анналы клинической и экспериментальной неврологии. 2010. №2. С. 44-51.