Реакция гемагглютинации. Описание и применение. Реакция гемагглютинации (РГА) Что такое реакция ви гемагглютинации

Диагностический серологический анализ по выявлению в сыворотке крови антител к Vi-антигенам возбудителя брюшного тифа предназначен для подтверждения либо отрицания факта носительства.

Сроки выполнения	7-8 дней

Синонимы (rus)	Серологический анализ на Vi-антитела возбудителя брюшного тифа в сыворотке крови

Cинонимы (eng)	Indirect hemagglutination assay for Salmonella typhi Vi antibodies

Метод анализа	Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

Подготовка к исследованию	Анализ проводится утром, натощак. С последнего приема пищи должно пройти не менее 8 часов.
	Исключить прием алкоголя не менее чем за 24 часа до взятия биоматериала.
	Не рекомендуется сдавать кровь на серологию после флюорографии, рентгена, физиотерапевтических процедур.

Биоматериал и способы его взятия	Венозная кровь

Общие сведения о брюшном тифе и его выявлении

Брюшной тиф относится к острым инфекционным кишечным заболеваниям. Для него характерны циклическое течение с системным поражением органов кишечника, ЦНС, печени, лимфатической системы; общая интоксикация организма, устойчивая бактериемия, при которой в крови обнаруживается присутствие бактерий. Источником инфекции являются больные, переболевшие бактерионосители.

Возбудитель брюшного тифа - сальмонелла Salmonella typhi , относится к кишечным бактериям.

Антигенная система возбудителя представлена антигенами O, H, Vi.

Антиген Vi является антигеном вирулентности , формирующим устойчивость возбудителя брюшнотифозной сальмонеллы к защитным реакциям организма. Наличие антител к Vi-антигенам Salmonella typhi при проведении серологического исследования образцов крови служит маркером бактерионосительства.

Метод исследования крови с Vi-антигеном

Выявление антител к эритроцитарным Vi-антигенам осуществляют с помощью серологической реакции непрямой гемагглютинации, РНГА , с применением специальных диагностикумов.

Метод РНГА :

основан на способности взаимодействия антител сыворотки крови и антигенов, которые фиксированы на эритроцитах (эритроцитарный диагностикум); результатом реакции является агрегация эритроцитов с последующим осаждением, агглютинация;
по характеру осадка эритроцитов судят о наличии антител (характерный «зонтик»), либо об их отсутствии (осадок в виде «точки»);
является полуколичественным; для проведения реакции используют разведения сыворотки крови для выявления диагностического титра;
минимальным диагностическим титром при проведении реакции является показатель 1:40;
повышение диагностической ценности реакции наблюдается при использовании повторного анализа (метод парных сывороток);
реакция высокочувствительна и специфична, может быть использована на пятый-седьмой дни заболевания.

Основное предназначение исследования - выявление бактерионосительства брюшнотифозной сальмонеллы.

Результаты анализа и их интерпретация

Результаты анализа могут быть положительными или отрицательными.

Положительный ответ:

выявление в крови антител к Vi-антигенам брюшнотифозного возбудителя (минимальное значение диагностического титра 1:40) рассматривается как указание на факт бактерионосительства и на необходимость повторного тестирования;
в ответе фиксируется значение титра;
может свидетельствовать о протекании острой инфекции, о перенесенном в прошлом заболевании, о проведенной вакцинации;
в редких случаях может быть ложноположительным вследствие перекрестной реакции.

Отрицательный ответ выдается в случае, если антитела не выявлены. Подобная ситуация возможна как при отсутствии инфицирования брюшнотифозным возбудителем, так и на ранних сроках заболевания.

Проведение данного исследования имеет особую важность для предотвращения случаев распространения брюшного тифа бактерионосителями.

Срок проведения анализа: до 7 днейСтоимость проведения анализа: 710 руб.Добавить в калькулятор

Получить результаты анализов
Акции и Скидки
Пациентам
Врачам
Организациям
Вызов на дом и в офис
Где сдать анализы
Полный список анализов
Фотогалерея

Вопросы и ответы

Стоимость анализов Вопрос: Здравствуйте! Просьба, написать стоимость следующих анализов. Планирую сдавать в г.Сочи Старонасыпная ул., 22, микрорайон Адлер, БЦ Офис Плаза, эт. 2 Для женщины: 1.УЗИ органов малого таза на 5-8 день менструального цикла. 2.Определение группы крови(в том числе и резус фактора). 3.Клинический анализ крови, включая свертываемость крови 4.Биохимический анализ крови (в т.ч. глюкоза, общий белок, прямой и непрямой билирубин, мочевина) 5.Анализ крови на сифилис, ВИЧ, гепатиты В и С 6.Коагулограмма (по показаниям) 7.Общий анализ мочи 8.Исследование состояния матки и маточных труб (лапароскопия, гистеросальпингография или гистеросальпингоскопия) - по показаниям. 9.Инфекционное обследование: - бактериологическое исследование отделяемого влагалища, цервикального канала из уретры (мазок на флору) - микроскопическое исследование отделяемого цервикального канала на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы, трихомонады, грибы рода Candida (посев из цервикального канала) - ПЦР (хламидии, уреа- и микоплазмы, вирус простого герпеса I-II типов, цитомегаловирус) (цервикальный канал) - определение антител класса М, G на токсоплазму, краснуху (кровь) 10.ЭКГ 11.Флюорография легких (действительна 12 месяцев). 12.Консультация терапевта 13.Кольпоскопия и цитологическое исследование шейки матки. 14.Маммография (женщинам старше 35 лет), УЗИ молочных желез (женщинам до 35 лет). 15.Хромосомный анализ супружеским парам старше 35 лет, женщинам, имеющим в анамнезе случаи врожденных пороков развития и хромосомных болезней, в том числе и у близких родственников; женщинам, страдающим первичной аменореей. 16.Гистероскопия и биопсия эндометрия (по показаниям). 17.Гормональное обследование: кровь на 2-5 дни менструального цикла: ЛГ, ФСГ, пролактин, тестостерон (св., общ.), эстрадиол, прогестерон, кортизол (800-1700), Т3 св, Т4 св, ТТГ, СТГ, АМГ, 17-ОП, ДГА-S . кровь на 20-22 день цикла: прогестерон. 18. Консультация эндокринолога(по показаниям). 19. Заключение профильных специалистов при наличии экстрагенитальной патологии (по показаниям). 20.УЗИ щитовидной железы и паращитовидных желез, почек и надпочечников (по показаниям). Для мужчины: 1.Анализ крови на сифилис, ВИЧ, гепатиты В и С (анализы действительны 3 месяца). 2. Спермограмма и МАР-тест 3. Микроскопическое исследование эякулята на аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы, трихомонады, грибы рода Candida (посев эякулята) (анализы действительны 6 месяцев). 4.ПЦР (хламидии, уреа- и микоплазмы, вирус простого герпеса I-II типов, цитомегаловирус) (эякулят). 5.Консультация андролога/уролога.

Ответ:

Здравствуйте! Стоимость услуг:

Для женщины:

1.УЗИ органов малого таза на 5-8 день менструального цикла. - 1500 руб.

2.Определение группы крови(в том числе и резус фактора). - 490 руб.

3.Клинический анализ крови, - 460 руб. включая свертываемость крови (Исследование времени кровотечения (время кровотечения/свертывания))- 220 руб.

4.Биохимический анализ крови (в т.ч. глюкоза - 159 руб., общий белок - 159 руб., прямой - 159 руб. и непрямой билирубин - 159 руб., мочевина - 159 руб.)

5.Анализ крови на сифилис, ВИЧ, гепатиты В и С - 1560 руб.

6.Коагулограмма (по показаниям)- 820 руб.

ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ

гемагглютина́ция (от греч. háima кровь и лат. agglutinatio склеивание), склеивание и выпадение в осадок эритроцитов под воздействием бактерий, вирусов, токсинов и др., способных адсорбироваться на поверхности эритроцитов, а также гемагглютининов. Эритроциты одного животного могут агглютинироваться сывороткой другого вследствие наличия в ней нормальных изогемагглютининов (антител). С помощью реакции Г. устанавливают . Феномен Г. используется при микробиологическом и иммунологическом исследованиях.

Различают прямую, или активную, и непрямую, или пассивную, Г. Прямая Г. обусловлена непосредственным воздействием бактериальных и вирусных агентов на эритроциты. При этом гемагглютинины с помощью фермента муциназы взаимодействуют с расположенными на поверхности эритроцитов рецепторами мукопротеазной природы, вызывая адсорбцию антигена. В результате взвесь эритроцитов (например, курицы) образует широкий осадок в форме зонтика с неровными краями. Эта реакция не является специфической, протекает без участия иммунной сыворотки. Прямую Г. применяют в серологических исследованиях, в частности при определении рабочего разведения антигена, используемого в реакции торможения Г. , в основе которой лежит задержка гемагглютинирующего действия антигена иммунной специфической сывороткой. Прямую Г. используют также для ориентировочной диагностики некоторых вирусных болезней (инфлюэнцы лошадей, чумы птиц, ньюкаслской болезни, гриппа уток). Непрямая Г. (РНГА) основана на способности сенсибилизированных эритроцитов (путём адсорбции на них антигена) агглютинироваться гомологичными антителами иммунной сыворотки. Благодаря высокой чувствительности и специфичности непрямой Г. её применяют для диагностики многих вирусных, бактериальных и риккетсиозных заболеваний. Существует несколько модификаций непрямой Г. реакции торможения, задержки, нейтрализации антител и др. С помощью РНГА и её модификаций могут быть выявлены как антитела в сыворотке крови животных и человека (при использовании эритроцитов, сенсибилизированных известным антигеном), так и антиген (при использовании эритроцитов, сенсибилизированных определёнными антителами). Для реакции применяют отмытые эритроциты разных видов животных (наиболее часто эритроциты барана и курицы). Способность эритроцитов к адсорбции крупномолекулярных антигенов белковой природы повышается после обработки их танином. Для повышения срока хранения эритроцитов их консервируют формалином. Полученные из формализированных эритроцитов диагностикумы могут длительное время сохранять свою активность. При наличии готовых эритроцитарных диагностикумов постановка реакции значительно упрощается. В ветеринарной практике РНГА применяют для диагностики некоторых (преимущественно вирусных) болезней животных классической чумы птиц ньюкаслской болезни, оспы коров, инфлюэнцы лошадей, гриппа свиней и уток, пуллороза тифа птиц и др. См. также , .

Литература:
Лабораторные исследования в ветеринарии, М., 1971;
Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М. О. Биргера 2 изд., М., 1973.

Ветеринарный энциклопедический словарь. - М.: "Советская Энциклопедия" . Главный редактор В.П. Шишков . 1981 .

Синонимы : Смотреть что такое "ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ" в других словарях:

гемагглютинация - гемагглютинация … Орфографический словарь-справочник

гемагглютинация - скучивание, агглютигация Словарь русских синонимов. гемагглютинация сущ., кол во синонимов: 2 агглютигация (3) … Словарь синонимов

ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ - (от гемо... и лат. agglutinatio склеивание) склеивание и выпадение в осадок взвешенных в жидкости эритроцитов под воздействием различных агентов, напр., антител, бактерий или вирусов. Реакция гемагглютинации применяется для диагностики… … Большой Энциклопедический словарь

Гемагглютинация - процесс склеивания эритроцитов в видимые невооруженным глазом агрегаты. Г. вызывают: 1) Ат к эритроцитарным и гетерофильным Аг; 2) Ат к чужеродным для эритроцитов Аг, адсорбированным на их поверхности (см. Гемагглютина ции реакция пассивная); 3) … Словарь микробиологии

ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ - ГЕМАГГЛЮТИНАЦИЯ, аглютинация (ску чивание) эритроцитов при смешивании с гомологичными сыворотками. Если человеческие эритроциты сменить с сывороткой того же лица, то при встряхивании получится равномерная взвесь. Если эритроциты одного лица… … Большая медицинская энциклопедия

гемагглютинация - Феномен, лежащий в основе способа определения антител, основанного на агглютинации ими эритроцитов в результате связывания либо с антигенами самих эритроцитов, либо с другими антигенами, искусственно присоединенными к поверхности эритроцитов.… … Справочник технического переводчика - (гем + агглютинация) агглютинация эритроцитов … Большой медицинский словарь

Гемагглютинация - от греч. haima кровь и лат. agglutinatio склеивание), процесс склеивания и последующего осаждения эритроцитов крови; вызывается гемагглютининами (См. Гемагтлютинины), бактериями и вирусами, агентами, способными адсорбироваться на… … Большая советская энциклопедия

гемагглютинация - склеивание (агглютинация) эритроцитов. Развивается, в том числе и при переливании несовместимой крови.

В лаборатории пользуются двумя различными по механизму действия реакциями гемагглютинации.

Первая РГА относится к серологическим. В этой реакции эритроциты агглютинируются при взаимодействии с соответствующими антителами (гемагглютининами). Реакцию широко используют для определения групп крови.

Вторая РГА не является серологической. В ней склеивание эритроцитов вызывают не

антитела, а особые вещества, образуемые вирусами. Например, вирус гриппа агглютинирует эритроциты кур и морских свинок, вирус полиомиелита - эритроциты барана. Эта реакция позволяет судить о наличии того или иного вируса в исследуемом материале.

Реакцию проводят в пробирках или на специальных пластинках с лунками. Исследуемый на наличие вируса материал разводят изотоническим раствором от 1:10 до 1:1280; 0,5 мл каждого разведения смешивают с равным объёмом 1-2% взвеси эритроцитов. В контроле 0,5 мл эритроцитов смешивают с 0,5 мл изотонического раствора. Пробирки ставят на 30 минут в термостат, а пластины оставляют при комнатной температуре на 45 минут.

Учёт результатов. При положительном результате реакции на дне пробирки или лунки выпадает осадок эритроцитов с фестончатыми краями («зонтик»), покрывающий всё дно лунки. При отрицательном результате эритроциты образуют плотный осадок с ровными краями («пуговку»). Такой же осадок должен быть в контроле. Интенсивность реакции выражают знаками «+». Титром вируса является максимальное разведение материала, в котором происходит агглютинация.

Реакция торможения гемагглютинации

Это серологическая реакция, в которой специфические противовирусные антитела, взаимодействуя с вирусом (антигеном), нейтрализуют его и лишают способности агглютинировать эритроциты, т. е. тормозят реакцию гемагглютинации. Эта реакция позволяет определить вид и тип вирусов.

Постановка реакции. 0,25 мл противовирусной сыворотки смешивают с равным объёмом материала, содержащего вирус. Смесь встряхивают и помещают в термостат на 30 минут, после чего добавляют по 0,5 мл"1-2% взвеси эритроцитов.

Учёт результатов. При правильной постановке опыта в контроле сыворотки и эритроцитов должна образоваться «пуговка» - нет агглютинирующего эритроциты фактора; в контроле антигена образуется «зонтик» - вирус вызвал агглютинацию эритроцитов. Если сыворотка гомологична изучаемому вирусу, образуется «пуговка» - сыворотка нейтрализовала вирус.

Реакция непрямой гемагглютинации

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РИГА) основана на том, что эритроциты, если на их поверхности адсорбировать растворимый антиген, приобретают способность агглютинироваться при взаимодействии с антителами к адсорбированному антигену.

Постановка реакции. Сыворотку прогревают 30 минут при 56 °С, разводят последовательно в соотношении 1:10 - 1:1280 и разливают по 0,25 мл в пробирки или лунки, куда затем добавляют по 2 капли эритроцитов с адсорбированными на них антигенами.

Контроли: взвесь эритроцитов с адсорбированными на них антигенами с заведомо иммунной сывороткой, взвесь эритроцитов с адсорбированными на них антигенами с нормальной сывороткой; взвесь нормальных эритроцитов с испытуемой сывороткой. В первом контроле должна произойти агглютинация, во втором и третьем её не должно быть.

Контрольные вопросы.

1. О чем свидетельствует положительный результат РГА между эритроцитами и исследуемым на наличие вируса материалом?

2. Произойдет ли реакция агглютинации эритроцитов, если к ним добавить вирус и соответствующую ему сыворотку? Как называется реакция, выявляющая этот феномен?

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА №12.

Реакция связывания комплемента.

Реакция связывания комплимента (РСК) основана на том, что" специфический комплекс антиген - антитело всегда адсорбирует на себе (связывает) комплемент.

Эту реакцию широко применяют при идентификации антигенов ив серодиагностике инфекций, особенно заболеваний, вызванных спирохетами (реакция Вассермана), риккетсиями и вирусами.

РКС-сложная серологическая реакция. В ней участвуют комплемент и две системы антиген-антитело. По существу, это две серологические реакции.

Правая система-основная состоит из антигена и антитела (один известный, др. нет). К ней добавляют определенное количество комплемента. При соответствии антигена и антитела этой системы они соединятся и свяжут комплимент. Образовавшийся комплекс мелкодисперсный и не виден.

Об образовании этого комплекса узнают с помощью второй системы гемолитической или индикаторной. В нее входят эритроциты барана (антиген) и соответствующая им гемолитическая сыворотка (антитело), т.е. готовый имунный комплекс. В этой системе лизис эритроцитов может произойти только в присутствии комплемента. Если комплемент связан первой системой, то во второй системе гемолиза не будет- т.к. нет свободного комплемента. Отсутствие гемолиза (содержимое пробирки мутное или на дне ее осадок эритроцитов) регистрируют как положительный результат РСК.

Если в первой системе антиген не соответствует антителу, то имунный комплекс не образуется и комплимент останется свободным. Оставшийся свободным, комплимент участвует во второй системе, вызывая гемолиз, результат РСК отрицательный(содержимое пробирок прозрачно-"лаковая кровь").

Компоненты, реакции связывания комплемента:

1. Антиген - обычно лизат, экстракт, гаптен,

реже взвесь микроорганизмов.

2. Антитело - сыворотка больного.

3. Комплемент - сыворотка морских свинок.

4. Антиген - эритроциты барана.

5. Антитело - гемолизин к эритроцитам барана.

6. Изотонический раствор.

Ввиду того, что в РСК участвует большое количество сложных компонентов,

они должны быть предварительно оттитрованы и взяты в реакцию в точных количествах и в равных объемах: по 0,5 или 0,25 , реже по 0,2,1,25 или 1,0 мл (большие объемы дают более точный результат). Титрование компонентов реакции проводят в том же объеме, в каком ставят опыт, заменяя недостающие ингредиенты изотоническим раствором.

Главная → Анализы → Иммунологический метод → Реакции гемагглютинации (иммунологический метод)

Реакции агглютинации основаны на взаимодействии реагента (антител) с антигенами, находящимися на поверхности клеток или инородных частиц. В результате образуются агрегаты крупного размера, которые выпадают в осадок и их можно увидеть даже невооруженным глазом. Таким образом определяют группу крови по системе АВО, наличие в ней резус-фактора и др. Это более чувствительный по сравнению с реакциями преципитации способ диагностики, так как объем осадка (агглютината) превосходит объем преципитата.

Прямая гемагглютинация

Реакция прямой гемагглютинации (РПГА) используется для выявления поверхностных антигенов микроорганизмов и эритроцитов, а также антител к ним.
К стандартным сывороткам, содержащим антитела, добавляют исследуемый материал (кровь). Скорость прямой реакции агглютинации связана с количеством исследуемого материала, количеством и концентрацией сыворотки, температурой окружающей среды.

Непрямая гемагглютинация

Реакцию непрямой гемагглютинации проводят для выявления антител в крови пациента с помощью эритроцитарного диагностикума. Реагент представляет собой эритроциты, на поверхности которых расположен антиген (белки микроорганизмов, токсинов, аллергенов и др.).
Сыворотку крови пациента разводят 0,9 %-ным раствором натрия хлорида, затем добавляют эритроцитарный диагностикум и отслеживают результат. Этот высокочувствительный способ диагностики выявляет антигены даже в небольших концентрациях.

Реакция гемагглютинации (РГА).

В лаборатории пользуются двумя различными по механизму действия реакциями гемагглютинации.

Вторая РГА не является серологической. В ней склеивание эритроцитов вызывают не

антитела, а особые вещества, образуемые вирусами. Например, вирус гриппа агглютинирует эритроциты кур и морских свинок, вирус полиомиелита — эритроциты барана. Эта реакция позволяет судить о наличии того или иного вируса в исследуемом материале.

Реакция гемагглютинации

Титром вируса является максимальное разведение материала, в котором происходит агглютинация.

Реакция торможения гемагглютинации

Учёт результатов. При правильной постановке опыта в контроле сыворотки и эритроцитов должна образоваться «пуговка» — нет агглютинирующего эритроциты фактора; в контроле антигена образуется «зонтик» — вирус вызвал агглютинацию эритроцитов. Если сыворотка гомологична изучаемому вирусу, образуется «пуговка» — сыворотка нейтрализовала вирус.

Реакция непрямой гемагглютинации

Постановка реакции. Сыворотку прогревают 30 минут при 56 °С, разводят последовательно в соотношении 1:10 — 1:1280 и разливают по 0,25 мл в пробирки или лунки, куда затем добавляют по 2 капли эритроцитов с адсорбированными на них антигенами.

Контрольные вопросы.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА №12.

Реакция связывания комплемента.

Реакция связывания комплимента (РСК) основана на том, что’ специфический комплекс антиген — антитело всегда адсорбирует на себе (связывает) комплемент.

Компоненты, реакции связывания комплемента:

1. Антиген — обычно лизат, экстракт, гаптен,

реже взвесь микроорганизмов.

2. Антитело — сыворотка больного.

3. Комплемент — сыворотка морских свинок.

4. Антиген — эритроциты барана.

5. Антитело — гемолизин к эритроцитам барана.

6. Изотонический раствор.

Ввиду того, что в РСК участвует большое количество сложных компонентов,

Похожая информация:

Поиск на сайте:

Реакция непрямой или пассивной гемагглютинации (РНГА или РПГА) более чувствительна и специфична, чем реакция агглютинации. Эту реакцию также используют в двух направлениях.

1) Для обнаружения антител в сыворотке крови больного приме-няются эритроцитарные диагностикумы, в которых антиген адсорби-рован на поверхности обработанных танином эритроцитов. В отноше-нии этой реакции чаще употребляют термин РПГА.

Исследуемую сыворотку разводят в лунках пластмассовых план-шетов и добавляют эритроцитарный диагностикум. При положитель-ной реакции появляется тонкая пленка по стенкам лунки в виде "кру-жевного зонтика», при отрицательной реакции — плотный осадок эрит-роцитов в виде "пуговки".

2) Для обнаружения токсинов и бактериальных антигенов в исс-ледуемом материале применяют антительные эритроцитарные диагнос-тикумы, полученные путем адсорбции антител на эритроцитах. В от-ношении этой реакции чаще употребляется термин РНГА. Например, с помощью антительных диагностикумов обнаруживают антиген па-лочки чумы, дифтерийный экзотоксин, ботулинический экзотоксин.

Что такое эритроцитарный диагностикум? Что такое антительный эритроцитарный диагностикум?

Эритроцитарные диагностикумы представляют собой эритроциты (обработанные танином или формалином) с адсорбированными на них антигенами, извлеченными из бактерий, и применяются в РПГА (реакции пассивной гемагглютинации). В том случае, когда РПГА используется для выявления антигена в выделениях больных, в тканях и др., применяют «антительные диагностикумы», т. е. эритроциты, сенсибилизированные антителами.

В РНГА выявляют антитела сыворотки крови с помощью антигенного эритроцитарного диагностикума, который представляет собой эритроциты с адсорбированными на них антигенами.

Методика постановки реакций. Реакция коагглютинации.

— фиксация эритроцитов формальдегидом или глютаровым, или акриловым альдегидами. Такие обработанные эритроциты длительно сохраняются. Чаще для этой цели используют эритроциты барана, человека, кур и др.;
— обработка фиксированных эритроцитов раствором танина. В результате эритроциты приобретают свойство необратимо адсорбировать на своей поверхности белки (вирусы и антитела);
— сенсибилизация танизированных эритроцитов вирусами или антителами.

Реакция коагглютинации (РКА)

Реакцию коагглютинации применяют для определения антигенов с помощью антител, адсорбированных на белке А клеток стафилококка (антительный диагностикум).
Белок А имеет сродство к Fc-фрагменту иммуноглобулинов, поэтому такие бактерии, обработанные иммунной диагностической сывороткой неспецифически адсорбируют антитела сыворотки, которые затем взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба.

Агглютинирующие сыворотки: что они содержат; как их получают, для чего применяются; что такое титр агглютинирующей сыворотки?

Агглютинирующую сыворотку получают иммунизацией кроликов (внутривенно, подкожно или внутрибрюшинно) взвесью убитых бактерий, начиная с дозы 200 млн., затем 500 млн., 1 млрд., 2 млрд., микробных тел в 1 мл, с интервалами 5 дней. Через 7-8 дней после последней иммунизации берут кровь и определяют титр антител.

Титром агглютинирующей сыворотки называется то максимальное разведение сыворотки, при котором происходит агглютинация с соответствующим микроорганизмом.

Агглютинирующие сыворотки применяются при идентификации микроба в развернутой реакции агглютинации.

Реакция гемагглютинации (РГА)

Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы.

В чём различия между поливалентными и моновалентными (монорецепторными) агглютинирующими сыворотками; почему при иммунизации кролика микробами одного вида получается сыворотка, содержащая антитела к нескольким антигенам?

Монорецепторные сыворотки — сыворотки, содержащие антитела толь-ко к одному антигену, и поливалентные сыворотки, дающие реакции аг-глютинации с двумя-тремя родственными бактериями, имеющими об-щий антиген. Агглютинирующие сыворотки применяют для идентификации микроорганизмов в реакции агглютинации. Недостатком таких сывороток является то, что они спо-собны давать групповые реакции агглютинации, т.к. они содержат ан-титела к бактериям, имеющим общие антигены.

Реакция гемагглютинации. Описание и применение

Основана на том, что эритроциты, на которых предварительно адсорбированы антигены, приобретают способность агглютинироваться в присутствии гомологичных сывороток (антител).

Эритроциты при этом выполняют роль носителей со специфическими детерминантами, агглютинация которых происходит в результате реакции антиген + антитело.

Эритроциты, к поверхности которых прочно присоединены антигены, называют эритроцитарным антигенным диагностикумом, или эритроцитами, сенсибилизированными антигеном.

Другой тип РНГА - на поверхности эритроцитов адсорбированы антитела и последующая их агглютинация происходит в присутствии гомологичного антигена. В этом случае такие эритроциты называют эритроцитарным антительным диагностикумом, или эритроцитами, сенсибилизированными антителами.

На основе этих двух принципиальных методических подходов разработаны и используются многие модификации РНГА. Так, в качестве носителей применяют мелкие стандартные частички латекса. В этом случае реакцию называют реакция латекс агглютинации (РЛА) или используют золотистый стафилококк - реакция коагглютинации и т. д. Обычно эритроцитарные диагностикумы готовят на предприятиях биологической промышленности, а в диагностических лабораториях ставят уже главный опыт РНГА.

Приготовление эритроцитарных диагностикумов включает следующие этапы:

фиксация эритроцитов формальдегидом или глютаровым, или акриловым альдегидами. Такие обработанные эритроциты длительно сохраняются. Чаще для этой цели используют эритроциты барана, человека, кур и др.;
обработка фиксированных эритроцитов раствором танина. В результате эритроциты приобретают свойство необратимо адсорбировать на своей поверхности белки (вирусы и антитела);
сенсибилизация танизированных эритроцитов вирусами или антителами.

Необходимо отметить, что методы приготовления эритроцитарных диагностикумов для вирусных инфекций различна.

Методика постановки РНГА для обнаружения и определения титра антител заключается в следующем:

к последовательным 2-кратным разведениям сыворотки добавляют равные дозы эритроцитов, сенсибилизированных антигеном;
смесь оставляют на 2-3 ч при комнатной температуре или на 16-18 ч при 4 °С;
учитывают результаты. Если в сыворотке содержатся антитела к вирусу, которым были сенсибилизированы эритроциты, наблюдают гемагглютинацию, которую оценивают в крестах.

За титр антител в сыворотке принимают наивысшее разведение сыворотки, которое еще обеспечивает гемагглютинацию не менее чем на два креста.

РНГА сопровождается всеми соответствующими контролями. Обычно ставят реакцию микрометодом.

РНГА позволяет решать следующие диагностические задачи:

обнаружить антитела и определить их титр в сыворотке крови с помощью известного эритроцитарного антигенного диагностикума;
обнаружить и идентифицировать неизвестный вирус с помощью известного эритроцитарного антительного диагностикума.

Достоинства РНГА: высокая чувствительность, простота техники постановки и быстрота ответа. Однако важно отметить, что возникают большие трудности в приготовлении стабильных эритроцитарных диагностикумов (большая зависимость от чистоты используемых компонентов, необходимость подбора режима фиксации, танизации и сенсибилизации эритроцитов для каждого вида вируса).

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Вконтакте

Грамотно проведенный анализ крови помогает обнаружить возбудителей различных сложных заболеваний в организме на ранних стадиях их развития, а порой даже до проявления клинических симптомов болезни. Очень часто врачи назначают пациентам проведение анализа на реакцию агглютинации. Дальше мы разберемся с тем, что это — РПГА анализ крови, когда он применяется и о чем может поведать?

Принцип действия

Реакция непрямой гемагглютинации (называемая также реакцией пассивной гемагглютинации он же РПГА, РНГА) происходит в случае, когда на адсорбировавшие антиген эритроциты воздействуют иммунной сывороткой, которая соответствует данному антигену.

Исследованиями доказано, что по специфичности и чувствительности данный метод значительно превосходит остальные серологические анализы. Поэтому ее часто используют для выявления заболеваний, вызванных бактериями или риккетсиями. В качестве антигенов для такого анализа могут выступать бактериальные экстракты, очищенные антигены различных микробов, компоненты бактериальных вакцин.

После попадания болезнетворной бактерии в организм человека, в нем начинают продуцироваться специфические и неспецифические антитела, формируя определенный иммунный ответ. В случае с сифилисом, возбудителем которого считается бледная трепонема, принадлежащая к грамотрицательным спирохетам, в крови человека вырабатываются нетрепонемные или трепонемные антитела. На их выявлении основаны лабораторные диагностические исследования, которые должны подтвердить или опровергнуть наличие возбудителя вируса в организме.

При РПГА эритроциты, поверхность которых адсорбировала антигены бледной трепонемы, в случае добавления сыворотки с антителами к трепонеме из материала человека, зараженного сифилисом, склеиваются друг с другом, то есть происходит их агглютинация.

Достоверность исследования

Важно помнить, что антитела к бледной спирохете начинают появляться в организме инфицированных людей через 2-4 недели после заражения, а в некоторых случаях этот срок может растягиваться и до 6 недель.

По этой причине чувствительность анализа на РПГА на первичной стадии развития болезни составляет около 86%, что значительно уступает точности диагностики больных на двух следующих стадиях. Чувствительность анализа для таких пациентов, как и для носителей скрытого сифилиса, достигает 99-100%.

Однако реакция пассивной гемагглютинации имеет очень высокую специфичность, которая достигает уровня 96-100%.

Это дает возможность применять данное обследование для подтверждения диагноза в случае получения положительной реакции предварительного нетрепонемного исследования, например реакции микропреципитации РМП.

Учитывая, что чувствительность трепонемных анализов, включая РПГА, существенно превышает чувствительность нетрепонемных методов, такие обследования стали все чаще назначать при проведении скрининговых анализов на сифилис. Однако при получении положительной реакции скринингового исследования для уточнения диагноза птребуется провести еще один специфический (трепонемный) анализ, но не РПГА.

Расшифровка анализа

При добавлении сыворотки с антителами к трепонеме из материала человека, инфицированного сифилисом, к реагенту, с которым проводится исследование, происходит агглютинация эритроцитов, вследствие чего они выпадают в осадок.

На количество склеенных эритроцитов влияет уровень содержания антител в сыворотке. Поэтому пассивная гемагглютинация не только показывает присутствие антител, но и позволяет установить их количество. Результат исследования представлен уровнем титра антител.

Положительная реакция говорит о наличии возбудителя болезни в организме пациента. Однако в процессе проведения диагностики возможно появление ложноположительных реакций, количество которых статистически не превышает уровня 0,05-2,5% от общего числа исследований.

Положительная реакция РПГА у людей, не инфицированных сифилисом, может проявляться в случае наличия:

системных заболеваний соединительной ткани,
в крови пациента антител к возбудителям, похожим на бледную трепонему,
физиологических патологий, например инфаркта миокарда,
гепатита В или С,
онкологических заболеваний,
тифа, лептоспироза, туберкулеза,
ВИЧ-инфекции,
боррелиоза клещевой этиологии,
обширных травм или переломов,
беременности,
в случае проведения инъекций наркотических препаратов.

В большинстве случаев ложноположительные реакции сопровождаются низким титром. Высокие показатели титра типичны для вторичной стадии болезни и ранее скрытого сифилиса. Однако они могут появиться и при ложноположительной реакции у пациентов со злокачественными новообразованиями.

У людей, хотя бы однажды переболевших сифилисом, реакция РПГА до конца жизни остается положительной.

Редкими исключениями могут служить те ситуации, когда болезнь была выявлена на ранней стадии развития, после чего была проведена интенсивная и эффективная терапия. Поэтому анализ РПГА не может использоваться для оценки динамики выздоровления или сравнительной диагностики ранней или поздней стадий болезни.

При получении положительной реакции необходимо обследовать членов семьи заболевшего человека и людей, вступавших с ним в половой контакт.

Отрицательная реакция может быть получена в следующих случаях:

человек не болен сифилисом,
неправильно взята кровь для исследования,
после заражения прошло 2-4 недели, и выработка антител еще не началась.

В любом случае результат исследования необходимо оценивать в сочетании с дополнительными лабораторными и анамнестическими показателями.

Кому показан анализ?

Врач может направить сдавать кровь на РПГА пациентов в следующих случаях:

при наличии клинических проявлений сифилиса: язвенных высыпаний, увеличенных лимфоузлов, диффузной алопеции и других,
при подозрении на возможное инфицирование в случае контакта с уже заболевшими людьми,
доноров, желающих сдать кровь,
людей, проходящих ежегодные профилактические осмотры или оформляющих санитарные книжки,
пациентов с положительной реакцией скринингового теста,
перед госпитализацией в стационарное лечебное учреждение,
при предоперационном обследовании,
для выявления возбудителей сальмонеллеза, дифтерии, дизентерии методом проведения РПГА с соответствующим диагностикумом.

Порядок проведения исследования

На исследование отправляют сданный пациентом образец венозной крови. Для того, чтобы не получить ошибочное заключение, пациенту следует ответственно отнестись к подготовке к анализу. Чтобы результаты теста были достоверными, следует придерживаться таких рекомендаций:

Сдавать анализ следует только натощак.
В день проведения анализа можно пить минеральную воду без газа в минимальных количествах.
Как минимум 30 минут до проведения анализа нельзя курить, а лучше увеличить это время до нескольких часов.
Прямой запрет налагается на употребление алкогольных напитков.
Пациенты, которым необходимо регулярно применять какие-либо лекарственные препараты, обязательно должны проинформировать об этом врача, направляющего на обследование.
В случае недомогания или плохого самочувствия нужно поставить в известность медсестру, выполняющую забор крови, или врачу амбулатории, где нужно сдать анализ.

Отнеситесь ответственно не только к вопросу, где сдать анализ, но и к подготовке к обследованию.

Не следует думать, что такое исследование, как РПГА может проводиться только для выявления в организме возбудителя сифилиса.

Анализ с сальмонеллезным диагностикумом позволяет выявить наличие инфекции в пищеварительной системе – сальмонеллы. Начиная с четвертого дня после заражения, организм продуцирует антитела к антигенам сальмонеллы, выявить которые помогает метод РПГА. Отрицательный результат говорит об отсутствии инфекции, а про ее наличие скажет положительный титр, нарастающий от 1:200 до 1:800 в острой фазе.

Метод проведения РПГА с дифтерийным маркером позволяет диагностировать дифтерию и оценить иммунитет после проведения вакцинации. Антитела начинают вырабатываться иммунной системой уже на следующий после заражения день, и остаются в организме на протяжении нескольких недель. Чувствительность данного анализа превосходит бактериологический метод исследования. Титр 1:80 подтверждает наличие дифтерии в организме.

Дизентерийный маркер при РПГА наиболее точно выявляет шигеллез (бактериальную дизентерию), даже по сравнению методом лабораторной диагностики посредством бактериального посева. Если больной не получает качественного лечения, то болезнь перетекает в хронический процесс, при котором часто случаются рецидивы. Анализ позволяет диагностировать острую и хроническую фазу диареи, выявить возбудителя дизентерии, отличить бактериальный шигеллез от колоректального рака, эндокринных нарушений или воспаления толстой кишки. Негативная реакция говорит об отсутствии бациллы, а подтверждает ее наличие титр 1:80 для малышей или 1:320 для взрослых.

Проведение исследование с коревым маркером позволяет определить заболевание корью. Такое обследование может стать альтернативой часто проводимому для диагностики кори анализу РТГА.

Итак, РПГА анализ крови – что же это? Подводя итоги, можно смело утверждать, что это современный, высокочувствительный и достоверный метод диагностики различных заболеваний бактериологической этиологии.

Вконтакте